Рейтинг: | ||
Адрес: http://ppp1.ru | ||
Безопасность данных: Не определена Степень доверия: Не определена Безопасность для детей: Не определена | ||
О сайте: Анализ данных ppp1.ru показал, что у этого домена отсутствует рейтинг Alexa и посещаемость данного сайта неизвестна. Лидирующую позицию по доле трафика занимает Россия (83,2%), а владельцем домена является Private Person. | ||
Заголовок: Just a moment… | ||
Мета-описание: Услуга по регистрации доменного имени PPP1.RU временно не предоставляется. | ||
Рейтинг Alexa Нет данных | Посетителей в день Нет данных | Просмотров в день Нет данных |
Статус: Оффлайн | Дата последней проверки:
|
Настраиваем два одновременных VPN соединения в Linux (для доступа в инет и для доступа к локальным ресурсам ISP)
Подключившись к новому провайдеру, предоставляющему доступ в сеть по впн пришлось столкнуться с кучей манов и факов на тему поднятия двух одновременно работающих впн-соединений в линях. Поднимал в убунте 9.10 и решил как-то скомпилировать инфу в один надеюсь понятный фак.Данный FAQ будет полезен тем, кто хочет настроить два одновременных впн-соединения для локальной и внешней сети.
Для начала нужно скачать пакет, который обеспечит поддержку нужного нам протокола соединения, для этого введём в терминале:
sudo apt-get install pptp-linux
После того как пакет установлен, идём писать конфиг соединения в папку /etc/ppp/peers, для этого нам понадобятся права админа (если их уже нет), для удобства напишу стандартный терминальный вход с нужными правами в терминальном редакторе nano в создаваемый файл конфигурации соединения:
sudo nano /etc/ppp/peers/connection_name1
Где connection_name1 — имя создаваемого подключения (можете назвать как вам удобно).
pty «pptp vpn.isp.ru —nolaunchpppd»
user «ваш логин»
password «ваш пароль»
unit 0
nodeflate
nobsdcomp
noauth
replacedefaultroute
defaultroute
persist
maxfail 0
Где vpn.isp.ru — впн-сервер для доступа в интернет вашего провайдера, а логин и пароль для доступа к интернету.
Жмём ctrl+x, потом подтверждаем сохранение клавишей Y.
Итак, первый конфиг готов, далее пишем второй для локального соединения:
sudo nano /etc/ppp/peers/connection_name2
Где опять же имя соединения можете придумать своё=)
Туда пишем:
pty «pptp vpnx.isp.ru —nolaunchpppd»
user «ваш логин»
password «ваш пароль»
unit 1
lock
nodeflate
nobsdcomp
noauth
persist
maxfail 0
Где vpnx.isp.ru — впн-сервер для доступа в локальную среду вашего провайдера, а логин и пароль также для локального доступа.
Сохраняем всё это дело ctrl+x, затем Y.
Конфиги готовы.
Теперь настроим автозапуск и маршрутизацию на локалку.
Для этого редактируем /etc/network/interfaces:
auto lo
iface lo inet loopback
auto eth0
‘up route add -net 10.0.0.0 netmask 255.0.0.0 gw 10.66.6.1
auto connection_name1
iface connection_name1 inet ppp
provider connection_name1
auto connection_name2
iface connection_name2 inet ppp
provider connection_name2
Тут вы можете внести маршруты для доступа к ресурсам непосредственно через имеющееся соединение (без впн). Пример такого маршрута я закомментировал, поэтому при добавлении маршрута Вам придётся убрать символ » ‘ » из данного конфига.
Где на месте 10.66.6.1 должен быть Ваш локальный шлюз.
Далее идём писать скрипты маршрутов для connection_name2.
Нам нужно создать /etc/ppp/ip-up.d/route
Пишем в терминале:
sudo nano /etc/ppp/ip-up.d/route
Пишем в открывшемся редакторе маршруты вида:
#!/bin/sh
ip route add 10.200.0.0/16 dev ppp1
Где ppp1 — ссылка на соединение connection_name2
Жмём ctrl+x, потом подтверждаем сохранение клавишей Y.
Затем делаем этот скрипт исполняемым, для этого пишем в терминале:
sudo chmod +x /etc/ppp/ip-up.d/route
Далее нужно создать скрипт на удаление маршрутов.
Пишем в терминале:
sudo nano /etc/ppp/ip-down.d/route
Пишем в открывшемся редакторе:
#!/bin/sh
ip route add default gw dev eth0
Жмём ctrl+x, потом подтверждаем сохранение клавишей Y.
Затем делаем этот скрипт исполняемым, для этого пишем в терминале:
sudo chmod +x /etc/ppp/ip-down.d/route
Всё, теперь пишем в терминале команду перезапуска сети:
sudo /etc/init.d/networking restart
И теперь инет настроен, маршруты прописаны. Конечная цель достигнута.
Надеюсь ничего не забыл.
Cisco Router 1941 настройка работы интернета в Билайн по l2tp
Многое поменялось. Теперь не нуно настраивать l2tp. Смотри подробнее здесьИсправления и замечания приветствуются.
L2TP SERVERS (BRAS)
85.21.0.241 — tp.internet.beeline.ru — работает как мне нужно
85.21.0.109 — tp.corbina.net — как минимум не предоставляет маршруты после авторизации. (руками не пробовал прописывать)
85.21.0.65 — vpn.corbina.ru — как минимум не предоставляет маршруты после авторизации. (руками не пробовал прописывать)
Базовая настройка роутера:
IOS: c1900-universalk9-mz.SPA.152-4.M2.bin
Последние версии ios крашились при попытке настроить NAT.
GigabitEthernet0/0 — внешняя сеть
GigabitEthernet0/1 — внутренняя сеть
cisco-router-1941> en
cisco-router-1941# conf t
– To enable the Domain Name System (DNS) server on a router
cisco-router-1941(config)# ip dns server
cisco-router-1941(config)# ip name-server 85.21.192.3
cisco-router-1941(config)# ip name-server 213.234.192.8
cisco-router-1941(config)# ip name-server 85.21.192.5
cisco-router-1941(config)# ntp server ntp.corbina.net
cisco-router-1941(config)# ntp server ru.pool.ntp.org
– удаляю прописанные ранее dns сервер и шлюз по умолчанию
cisco-router-1941(config)#no ip name-server 192.168.1.1
cisco-router-1941(config)# no ip default-gateway 192.168.1.1
Предварительная настройка интерфейсов
– GigabitEthernet0/0
cisco-router-1941(config)# interface GigabitEthernet0/0
cisco-router-1941(config)# ip address dhcp
cisco-router-1941(config)# load-interval 30
cisco-router-1941(config)# description ISP-External-Local
cisco-router-1941(config)# no shutdown
cisco-router-1941(config)# exit
cisco-router-1941(config)# interface GigabitEthernet0/1
cisco-router-1941(config)# ip address 192.168.1.1 255.255.255.0
cisco-router-1941(config)# description Internal-NetWork
cisco-router-1941(config)# no shutdown
cisco-router-1941(config-if)# exit
cisco-router-1941(config)# exit
– проверка получения ip адреса от провайдера
cisco-router-1941# show dhcp lease
Temp IP addr: 10.111.0.8 for peer on Interface: GigabitEthernet0/0 Temp sub net mask: 255.255.248.0 DHCP Lease server: 78.107.63.102, state: 5 Bound DHCP transaction id: 19EA Lease: 973148 secs, Renewal: 486574 secs, Rebind: 851504 secs Temp ip static route0: dest 195.14.50.26 router 10.111.0.1 Temp ip static route1: dest 195.14.50.16 router 10.111.0.1 Next timer fires after: 5d15h Retry count: 0 Client-ID: cisco-a493.4cba.00a0-Gi0/0 Client-ID hex dump: 636973636F2D613439332E346362612E 303061302D4769302F30 Hostname: cisco-router-1941
cisco-router-1941# show ip interface brief
Interface IP-Address OK? Method Status Protocol Embedded-Service-Engine0/0 unassigned YES NVRAM administratively down down GigabitEthernet0/0 10.111.0.8 YES DHCP up up GigabitEthernet0/1 192.168.1.1 YES manual up up
Подготовка роутера к созданию l2tp соединения:
cisco-router-1941# conf t
cisco-router-1941(config)# l2tp-class DEFAULT-L2TP-CLASS
cisco-router-1941(config-l2tp-class)# end
cisco-router-1941# conf t
cisco-router-1941(config)# pseudowire-class PW-L2TP-GigabitEthernet0/0
cisco-router-1941(config-pw-class)# encapsulation l2tpv2
cisco-router-1941(config-pw-class)# protocol l2tpv2 DEFAULT-L2TP-CLASS
cisco-router-1941(config-pw-class)# ip local interface GigabitEthernet0/0
cisco-router-1941(config-pw-class)# end
Создание туннельного интерфейса Virtual-PPP1:
cisco-router-1941# conf t
cisco-router-1941(config)# interface Virtual-PPP1
cisco-router-1941(config-if)# description ISP-External-Internet
cisco-router-1941(config-if)# ip mtu 1460
cisco-router-1941(config-if)# ip tcp adjust-mss 1420
– Данная функция позволяет предотвратить атаки связанные с фрагментацией пакетов, приводящая к переполнению буфера . Когда атакующим посылаются много незаконченных фрагментрированных пакетов и фаерволлу приходится их собирать, тратя на это память и время. В IOS с поддержкой безопасности включена по умолчанию.
cisco-router-1941(config-if)# no ip virtual-reassembly
– Если дать команду no peer neighbor-route, то перестанет работать механизм ipcp, т.е. не будут автоматически прописаны маршруты по-умолчанию, нужно будет их прописать самостоятельно. Узнать можно, например, посмотрев на компьютере, подключенному к сети напрямую, получившим эти маршруты. Или где-то на сайте билайна.
cisco-router-1941(config-if)# no peer neighbor-route
cisco-router-1941(config-if)# no cdp enable
cisco-router-1941(config-if)# ip address negotiated
cisco-router-1941(config-if)# no ppp authentication chap callin
– В следующих 2-х командах, нужно руками вводить свой логин и пароль для доступа в интернет.
cisco-router-1941(config-if)# ppp chap hostname 'your-login'
cisco-router-1941(config-if)# ppp chap password 'your-pass'
– Ну почему нельзя ввести какое-нибудь dns имя вместо IP?
– cisco-router-1941(config-if)# pseudowire <l2tp server> 10 pw-class PW-L2TP-GigabitEthernet0/0
cisco-router-1941(config-if)# pseudowire 85.21.0.241 10 pw-class PW-L2TP-GigabitEthernet0/0
cisco-router-1941(config-if-xconn)# end
– Virtual-PPP1 присвоен ожидаемый IP адрес.
cisco-router-1941# show ip interface brief
Interface IP-Address OK? Method Status Protocol Embedded-Service-Engine0/0 unassigned YES NVRAM administratively down down GigabitEthernet0/0 10.111.0.8 YES DHCP up up GigabitEthernet0/1 192.168.1.2 YES NVRAM up up Virtual-PPP1 95.31.31.8 YES IPCP up up
Проверка работы интернета на маршрутизаторе
– Проверили локалку
cisco-router-1941# ping beeline.ru
Translating "beeline.ru"...domain server (85.21.192.3) [OK] Type escape sequence to abort. Sending 5, 100-byte ICMP Echos to 217.118.87.98, timeout is 2 seconds: !!!!! Success rate is 100 percent (5/5), round-trip min/avg/max = 1/3/4 ms
– Проверили Интернет
cisco-router-1941# ping ya.ru source Virtual-PPP1
Translating "ya.ru"...domain server (85.21.192.3) [OK] Type escape sequence to abort. Sending 5, 100-byte ICMP Echos to 213.180.204.3, timeout is 2 seconds: Packet sent with a source address of 95.31.31.8 !!!!! Success rate is 100 percent (5/5), round-trip min/avg/max = 4/19/80 ms
Настройка NAT
cisco-router-1941# conf t cisco-router-1941(config)# interface GigabitEthernet0/1 cisco-router-1941(config-if)# ip nat inside cisco-router-1941(config)# interface GigabitEthernet0/0 cisco-router-1941(config-if)# ip nat outside cisco-router-1941(config)# interface Virtual-PPP1 cisco-router-1941(config-if)# ip nat outside cisco-router-1941(config-if)#exit
– Листы доступа
cisco-router-1941(config)# ip access-list extended nat cisco-router-1941(config-ext-nacl)# deny ip any host 85.21.0.241 cisco-router-1941(config-ext-nacl)# permit ip 192.168.1.0 0.0.0.255 any cisco-router-1941(config-ext-nacl)# exit cisco-router-1941(config)# route-map public permit 10 cisco-router-1941(config-route-map)# match ip address nat cisco-router-1941(config-route-map)# match interface Virtual-PPP1 cisco-router-1941(config-route-map)# exit cisco-router-1941(config)# route-map local permit 10 cisco-router-1941(config-route-map)# match ip address nat cisco-router-1941(config-route-map)# match interface GigabitEthernet0/0 cisco-router-1941(config-route-map)# exit cisco-router-1941(config)# ip nat inside source route-map local interface GigabitEthernet0/0 cisco-router-1941(config)# ip nat inside source route-map public interface Virtual-PPP1 overload
Обязательные маршруты
cisco-router-1941(config)#ip forward-protocol nd cisco-router-1941(config)#ip route 0.0.0.0 0.0.0.0 Virtual-PPP1 cisco-router-1941(config)#ip route 85.21.0.241 255.255.255.255 dhcp
cisco-router-1941# show ip route Gateway of last resort is 10.111.0.1 to network 0.0.0.0 S* 0.0.0.0/0 [254/0] via 10.111.0.1 10.0.0.0/8 is variably subnetted, 3 subnets, 3 masks S 10.0.0.0/8 [1/0] via 10.111.0.1 C 10.111.0.0/21 is directly connected, GigabitEthernet0/0 L 10.111.0.8/32 is directly connected, GigabitEthernet0/0 78.0.0.0/32 is subnetted, 1 subnets S 78.107.63.102 [254/0] via 10.111.0.1, GigabitEthernet0/0 85.0.0.0/32 is subnetted, 2 subnets C 85.21.0.241 is directly connected, Virtual-PPP1 S 85.21.192.3 [1/0] via 10.111.0.1 89.0.0.0/32 is subnetted, 1 subnets S 89.179.135.67 [1/0] via 10.111.0.1 95.0.0.0/32 is subnetted, 1 subnets C 95.31.31.8 is directly connected, Virtual-PPP1 192.168.1.0/24 is variably subnetted, 2 subnets, 2 masks C 192.168.1.0/24 is directly connected, GigabitEthernet0/1 L 192.168.1.2/32 is directly connected, GigabitEthernet0/1 195.14.50.0/32 is subnetted, 2 subnets S 195.14.50.16 [254/0] via 10.111.0.1 S 195.14.50.26 [254/0] via 10.111.0.1 213.234.192.0/32 is subnetted, 1 subnets S 213.234.192.8 [1/0] via 10.111.0.1
Почитать:
http://homenet.beeline.ru/index.php?showtopic=206930&st=0
http://habrahabr.ru/post/136342/
Первый Международный Позитивный Информационный портал: PPP1.ru
Первый Международный Позитивный Информационный портал: PPP1.ru ☰Failed to load data.
{{#domain}}{{domain_decode}}
{{/domain}} PPP1.ru — Первый Международный Позитивный Информационный портал [ + ] See more [ — ] See lessПервый Международный Позитивный Информационный портал
The domain PPP1.ru was registered 2014-01-27. The website is currently online. It is ranked #924,681 in the world . There are more than 300 visitors and the pages are viewed up to n/a times for every day. Usually, it takes n/a seconds for the visitors to open the website. Based on current visitor traffic, you will know that the advertising revenue on the website will be able to reach n/a USD per day. The server of the website is being hosted in France.
Alexa Traffic Graph
Search Traffic (Percentage)
Daily Visitors
(Last 90 days)The chart below shows how many visitors visited the website PPP1.ru every day for the past 90 days. The last record was on Oct 12, 2020, and about 300 visitors visited this site.
Daily Visitors by Keyword
Failed to load data.
# | Keyword | Visitors | Percentage |
---|---|---|---|
{{ref}} | {{#is_url}}{{keyword}}{{/is_url}}{{^is_url}}{{keyword}}{{/is_url}} | {{#visitors}}{{visitors}}{{/visitors}}{{^visitors}}-{{/visitors}} | {{percent}} |
No data.
{{/intro.total}} See more…Ошибка при использовании символов Юникода для отображения математических операторов в мозаичном графике
Например, это работает:
library("vcd")
library("vcdExtra")
ppp1 <- Arthritis[,-1]
ppp1 <- ppp1 [,-3]
colnames(ppp1)[1] <- "Dose"
colnames(ppp1)[3] <- "Symptoms"
ppp1$Symptoms <- ordered(ppp1$Symptoms,
levels = c("None", "Some", "Marked"),
labels = c(">2", "1-2", "<1"))
ppp1$Dose <- ordered(ppp1$Dose,
levels = c("Placebo","Treated"),
labels = c("<= 1", ">=2"))
tab1 <- xtabs(~Symptoms+Sex+Dose, data=ppp1)
mosaic(tab1)
Но это приводит к ошибке:
ppp2<- Arthritis[,-1]
ppp2 <- ppp2 [,-3]
colnames(ppp2)[1] <- "Dose"
colnames(ppp2)[3] <- "Symptoms"
ppp2$Symptoms <- ordered(ppp2$Symptoms,
levels = c("None", "Some", "Marked"),
labels = c(">2", "1-2", "<1"))
ppp2$Dose <- ordered(ppp2$Dose,
levels = c("Placebo","Treated"),
labels = c("\u2264 1", "\u2265 2"))
tab2 <- xtabs(~Symptoms+Sex+Dose, data=ppp2)
mosaic(tab2)
Ошибка в grid.Call.graphics(C_downviewport, name$name, strict) :
Видовой экран ‘cell:Symptoms=<1, пол=мужчина, доза=≥ 2’ не найден
Любые идеи будут очень ценны.
r mosaic-plotПоделиться Источник Krantz 24 февраля 2018 в 16:24
1 ответ
- Модуль без математических операторов
Я хочу создать метод, который дает число n и число 16 и применяет к ним оператор модуля (n % 16) . То, что делает это трудным для меня, заключается в том, что мне не нужно использовать ни один из математических операторов (+, -, /, *, %).
- как сделать строчные буквы для символов Юникода
У меня есть проблема с преобразованием в строчные буквы символов Юникода в VC++ MFC. У меня есть символы юникода в английском языке CString Variable.so,with MakeLower() работает нормально,и я получаю нижний регистр. Но он не может преобразовать символы юникода в нижний регистр. Я действительно…
1
Вот решение, основанное на пакете ggmosaic
.
Важно: ggmosaic
отлично работает с версией CRAN ggplot2
, которую можно установить с помощью install.packages("ggplot2")
library(vcd)
library(vcdExtra)
ppp2 <- Arthritis[,-c(1,4)]
names(ppp2) <- c("Dose", "Sex", "Symptoms")
ppp2$Symptoms <- ordered(ppp2$Symptoms, levels=c("None","Some","Marked"),
labels=c(">2", "1-2", "<1"))
ppp2$Dose <- ordered(ppp2$Dose, levels = c("Placebo","Treated"),
labels = c("<= 1", ">= 2"))
# Reverse the order of levels for Dose and Symptoms
ppp2$Symptoms <- factor(ppp2$Symptoms, levels=rev(levels(ppp2$Symptoms)), order=T)
ppp2$Dose <- factor(ppp2$Dose, levels=rev(levels(ppp2$Dose)), order=T)
# Plot mosaic using geom_mosaic from ggmosaic
library(ggplot2)
p <- ggplot(data=ppp2) +
geom_mosaic(aes(x=product(Dose, Sex, Symptoms), fill=Sex), offset=.03) +
coord_flip() + xlab("Symptoms; Dose")
# Get grobs
gt <- ggplot_gtable(ggplot_build(p))
gt$layout$clip[gt$layout$name == "panel"] <- "off"
# Modify ticks labels on y-axis
gt$grobs[[3]]$children[[2]]$grobs[[1]]$children[[1]]$label <-
c("\u2265 2; <1", "\u2264 1; <1",
"\u2265 2; 1-2", "\u2264 1; 1-2",
"\u2265 2; >2", "\u2264 1; >2")
# Plot the mosaic plot
library(grid)
grid.draw(gt)
Поделиться Marco Sandri 25 февраля 2018 в 00:23
Похожие вопросы:
Фильтр символов Юникода в массиве символов
У меня есть массив символов, который может содержать или не содержать символы Юникода. Когда он присутствует, он будет представлять собой смесь символов Unicode и ASCII. Мне нужно найти способ,…
Каррирование математических операторов в Scala
Я хочу создать простую карту от математических операторов к соответствующим функциям: var ops = Map(+ -> +, — -> -) Как бы я сделал это в Scala?
Emacs: настройка шрифта для отображения символов Юникода в OSX
Я пытаюсь отобразить специальные символы юникода, в частности математический оператор в emacs. Конкретно: position: 283 of 317 (89%), column: 0 character: (displayed as ) (codepoint 120046,…
Модуль без математических операторов
Я хочу создать метод, который дает число n и число 16 и применяет к ним оператор модуля (n % 16) . То, что делает это трудным для меня, заключается в том, что мне не нужно использовать ни один из…
как сделать строчные буквы для символов Юникода
У меня есть проблема с преобразованием в строчные буквы символов Юникода в VC++ MFC. У меня есть символы юникода в английском языке CString Variable.so,with MakeLower() работает нормально,и я…
Можно ли определить массив для хранения математических операторов [+- * /] в Matlab?
Можно ли определить массив для хранения математических операторов [+- * /] в Matlab? У меня есть массив чисел [1 1 1 1], то есть 4 цифры. Я хотел бы перебрать все возможные комбинации цифр, изменяя…
Как отключить ось y в мозаичном графике?
Как отключить ось y в мозаичном графике? Пример: x <- data.frame(o=c(rep(AAAAAAAAAAAAAAAAAAA,50),rep(BBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBBB,40),rep(CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC,70)),r=runif(160))…
Как безопасно хранить символы Юникода в файлах cookie?
Я использую файлы cookie для отображения некоторых данных на странице поиска, но мои файлы cookie искажают значения при использовании символов Юникода. Например, когда я храню Inglês , я получаю…
Размещение символов Юникода в Apigee
При отправке символов Юникода Apigee, похоже, отрицает это. Значения вводятся в NSDictionary так, используя приведенный ниже код: NSMutableDictionary *entity = [[NSMutableDictionary alloc] init ];…
Ошибка при использовании Console.ReadLine для отображения набора символов
Я новичок в программировании c#, я работал над простой программой,но попал в блок. Код отлично работает, когда я использую Console.Read() , однако он отображает только первый символ…
DYMO LabelMANAGER 210D Etiqueteuse N&B transfert thermique Rouleau (1,2 cm) 180 ppp Hauteur: 97 mm, 1,2 cm DYMO LabelMANAGER 210D Etiqueteuse N&B transfert thermique Rouleau 180 ppp, Nombre de polices: 1, Achetez DYMO LabelMANAGER 210D Etiqueteuse N&B transfert thermique Rouleau (1, Écran: LCD, Nombre de batteries prises en charge: 6, Largeur: 222 mm, Otras características:, Lignes d’impression max: 2, Type de bande magnétique: D1, DYMO LabelMANAGER 210D Etiqueteuse N&B transfert thermique Rouleau 180 ppp 1,2 cm, Résolution maximale: 180 x 180 DPI, Profondeur: 203 mm, Argent, DYMO LabelMANAGER 210D Etiqueteuse N&B transfert thermique Rouleau (1, DYMO LabelManager 210D, Longueur fixe: Oui, Couleur du produit: Noir, Type de bande magnétique: D1, Disposition des touches du clavier: QWERTY, Connexion PC: Non, Type de batterie: AA Taille de la bande magnétique: 6 mm, Poids: 812 g, Résolution maximale: 180 x 180 DPI, Dimensions (LxPxH): 222 x 203 x 97 mm, Technologie d’impression: Thermique directe, Mémoire d’étiquettes: 9 étiquette(s), Disposition des touches du clavier: QWERTY, Écran: LCD, Type de batterie: AA, Mémoire d’étiquettes: 9 étiquette(s), 2 cm) 180 ppp: Dymo: Fournitures de bureau, Couleur du produit: Noir, Nombre de styles: 7, Technologie d’impression: Thermique directe, Souligné: Oui, 2 cm) 180 ppp: ✓ Livraison & retours gratuits possibles (voir conditions), Coupure automatique de l’alimentation: Oui, Aperçu avant impression: Oui, 180 ppp DYMO LabelMANAGER 210D Etiqueteuse N&B transfert thermique Rouleau 1,2 cm, DYMO LabelMANAGER 210D Etiqueteuse N&B transfert thermique Rouleau (1,2 cm) 180 ppp, Argent, Couleur: Non Производственная деятельность:
Торговля: Головной офис оптовой торговли автозапчастями в г. Тольятти, сеть филиалов в г.г. Самара, Москва, Набережные Челны, Чебоксары, Саратов, Ульяновск, Коломна, Балаково. ООО «СТК» (г. Набережные Челны) — производственное предприятие. «ТАЯ — АВТОZАПЧАСТИ» — магазины розничной торговли. «ТАЯ — АВТОZАПЧАСТИ» — станции технического обслуживания автомобилей. |
pptpd — ALT Linux Wiki
Настройка сервера PPTP[править]
# apt-get install pptpd
Настройки сервера pptpd:
$ cat /etc/pptpd.conf localip 192.168.99.1 remoteip 192.168.99.200-238,192.168.99.245
- localip — адрес сервера
- remoteip — список адресов, которые будут выдаваться клиентам
Настройка параметров соединения:
/etc/ppp/options.pptpd
Задание пользователей и паролей:
$ cat /etc/ppp/chap-secrets ЛОГИН pptpd ПАРОЛЬ *
Включаем сервис:
# chkconfig pptpd on # service pptpd start Starting pptpd service: [ DONE ]
В системных логах должно записываться, как проходит соединение:
2020-09-08T03:35:29.029209+03:00 gateway2 pptpd[135231]: CTRL: Client 192.168.0.55 control connection started 2020-09-08T03:35:30.027996+03:00 gateway2 pptpd[135231]: CTRL: Starting call (launching pppd, opening GRE) 2020-09-08T03:35:30.034347+03:00 gateway2 pppd[135232]: Plugin /usr/lib64/pptpd/pptpd-logwtmp.so loaded. 2020-09-08T03:35:30.034786+03:00 gateway2 pppd[135232]: pppd 2.4.7 started by lav, uid 0 2020-09-08T03:35:30.035508+03:00 gateway2 pppd[135232]: Using interface ppp1 2020-09-08T03:35:30.035699+03:00 gateway2 pppd[135232]: Connect: ppp1 <--> /dev/pts/7 2020-09-08T03:35:30.037762+03:00 gateway2 pppd[135232]: peer from calling number 192.168.0.55 authorized 2020-09-08T03:35:30.040051+03:00 gateway2 pppd[135232]: local IP address 192.168.11.1 2020-09-08T03:35:30.040061+03:00 gateway2 pppd[135232]: remote IP address 192.168.11.234 2020-09-08T03:35:30.238331+03:00 gateway2 pppd[135232]: Script /etc/ppp/ip-up finished (pid 135235), status = 0x0 2020-09-08T03:36:13.154202+03:00 gateway2 pppd[135232]: Hangup (SIGHUP) 2020-09-08T03:36:13.154222+03:00 gateway2 pppd[135232]: Modem hangup 2020-09-08T03:36:13.154595+03:00 gateway2 pppd[135232]: Connect time 0.8 minutes. 2020-09-08T03:36:13.154603+03:00 gateway2 pppd[135232]: Sent 420 bytes, received 1915 bytes. 2020-09-08T03:36:13.157628+03:00 gateway2 pppd[135232]: Connection terminated. 2020-09-08T03:36:13.286869+03:00 gateway2 pppd[135232]: Script /etc/ppp/ip-down finished (pid 135245), status = 0x1 2020-09-08T03:36:13.287021+03:00 gateway2 pppd[135232]: Exit.
Основные обновления программы защиты зарплаты
21 декабря Конгресс принял Закон о консолидированных ассигнованиях , 2021 , законопроект о расходах на 2,3 триллиона долларов, который включает пакет стимулов на 900 миллиардов долларов, предназначенный для предоставления дополнительной финансовой помощи физическим и юридическим лицам, пострадавшим от COVID-19 пандемия. Законопроект подписан 27 декабря 2020 года.
Закон содержит положения, дополняющие Закон CARES и Программу защиты зарплаты, принятую весной 2020 года.AAFCPA выделил для вашего удобства ключевые положения Раздела N, Раздел III, Продолжение программы защиты зарплаты и другой поддержки малого бизнеса , касающиеся прощения существующих ссуд ГЧП и ссуд второго розыгрыша ГЧП.
Обновления программы прощения ссуд по программе защиты зарплаты (PPP1)Ключевые изменения в прощении ссуд ГЧП, кратко изложенные ниже, вступают в силу, как если бы они были изначально включены в Закон о CARES, и, таким образом, применимы как к существующим, так и к новым ссудам второй выдачи (за исключением ссуд, которые уже были прощены на момент действует законодательство, если не указано иное):
- Налогообложение: Прощение ссуды исключается из налогооблагаемой прибыли, и квалифицируемые коммерческие расходы, оплаченные с использованием поступлений от ссуды ГЧП, действительно подлежат вычету, даже если ссуда прощена.Аванс по ссуде на покрытие экономического ущерба (EIDL) не облагается налогом.
- Дополнительные приемлемые расходы: В дополнение к приемлемым расходам на заработную плату, проценты по ипотеке, арендную плату и коммунальные услуги теперь ТАКЖЕ имеют право следующие расходы:
- Расходы на защиту персонала и модификацию объекта, включая средства индивидуальной защиты, в соответствии с федеральными директивами по охране здоровья и безопасности COVID-19;
- Операционные расходы, такие как программное обеспечение, услуги облачных вычислений и бухгалтерские нужды; и
- Расходы на материальный ущерб, такие как расходы, связанные с повреждением имущества и вандализмом или грабежами в результате общественных беспорядков, произошедших в течение 2020 года, которые НЕ были покрыты страховкой или другой компенсацией.
- Упрощенное прощение для ссуд на сумму до 150 000 долларов США: Для ссуд до 150 000 долларов США заемщики будут иметь упрощенный процесс подачи заявления о прощении, состоящий из подписания и предоставления кредитору сертификата, который:
- — не более 1 страницы;
- указывает количество сотрудников, которых заемщик смог удержать из-за ссуды, расчетную сумму ссуды, потраченную на оплату труда, и общую стоимость ссуды; и
- подтверждает, что заемщик точно предоставил необходимую сертификацию, выполнил все требования кредитной программы ГЧП и хранит записи, подтверждающие соблюдение требований, в течение 3-4 лет (в зависимости от типа записи, 4 года для записей, связанных с кадрами и 3 года для всех остальных).
AAFCPA подозревает, что для этого приложения будет использоваться форма заявки 3508S (которая ранее применялась только к организациям, ссуды которых составляли менее 50 тыс.). Однако SBA еще не пересмотрело свои рекомендации.
- Теперь право на участие распространяется на 501 (c) (6) и целевые маркетинговые организации с ограничениями, зависящими от степени лоббирования, в котором участвует организация.
- Аудиты: В течение 45 дней после вступления в силу SBA должно представить в Сенат и Палату представителей план проведения обзоров и аудитов покрытых займов на сумму более 150 000 долларов США, а также показатели, которые SBA должно использовать для определения того, какие займы подлежат аудиту. .В течение 30 дней после подачи плана и каждый месяц после этого SBA должно представлять отчет о статусе проверки прощения и аудиторской деятельности.
- Расширенное определение льгот как части расходов на заработную плату : В дополнение к групповым льготам по медицинскому обслуживанию, расходы по заработной плате теперь будут включать в себя расходы на групповую жизнь, инвалидность, зрение или стоматологическое страхование.
- Отмена удержания аванса EIDL : Ранее заемщики, которые получали ссуду ГЧП, а также аванс EIDL, должны были вычесть сумму своего аванса EIDL из суммы прощения ссуды ГЧП.Этот авансовый вычет EIDL теперь отменен. SBA установит процедуру для заемщиков, которые уже получили прощение ссуды в рамках ГЧП и у которых аванс EIDL был вычтен из суммы прощения ссуды, которая будет полностью возвращена.
- Право на получение кредита для удержания сотрудников: Организации, получившие ссуду в рамках ГЧП, теперь имеют право на получение кредита для удержания сотрудников. Организации могут иметь право на оба.
Второй заем ГЧП, называемый «вторым розыгрышем ГЧП», будет предоставлен определенным предприятиям, имеющим право на участие.Второй розыгрыш ГЧП призван помочь малым предприятиям, которые пострадали от пандемии в большей степени, чем первый раунд кредитов ГЧП. Приблизительно 275 миллиардов долларов финансирования было зарезервировано для PPP2 и возможности перепрофилировать любые ранее неиспользованные средства PPP1. В следующей таблице представлены основные положения, касающиеся второго розыгрыша ГЧП.
ГЧП 2 — Ссуды второго розыгрыша | |
---|---|
Израсходовано PPP1 — квалификационное требование | Организация должна была использовать или будет использовать полную сумму своего первого кредита PPP1. |
Ограничение размера — квалификационные требования | Не более 300 сотрудников (меньше 500) или альтернативный стандарт размера, если применимо. Ограничение действует для каждого местоположения с правомочными работодателями, у которых более одного местоположения. Обратите внимание, что это количество сотрудников, а НЕ количество сотрудников, как в PPP1. |
Уменьшение валовой выручки — Право на участие | Кандидаты должны продемонстрировать снижение валовой выручки не менее на 25% в любом квартале 2020 года по сравнению с тем же кварталом 2019 года. Для ссуд на сумму до 150 тыс. Долларов заемщик может представить свидетельство, подтверждающее, что он соответствует требованиям к потере дохода, а затем должен предоставить документацию о том, что потеря дохода была компенсирована до подачи заявления о прощении. Особые правила применяются к тем, которые не работают в течение всего 2019 года. Валовая выручка НЕ включает полученные средства EIDL или PPP. ПРИМЕЧАНИЕ. AAFCPA рекомендует клиентам рассмотреть возможность получения кредита на удержание сотрудников. |
Необходимость — Право на участие | Организации должны подтвердить необходимость получения кредита.(Неясно, будут ли две суммы ссуды агрегированы для целей специальных правил, применяемых к ссудам свыше 2 миллионов.) |
Срок подачи заявок | Будет открыт до 31 марта 2021 г. , хотя в настоящее время ни один банк не принимает участие в PPP2. Это также продлевает срок подачи заявок на PPP1. |
Определение суммы кредита | До 2,5-кратных ежемесячных расходов на заработную плату (то же, что и PPP1), расходы на заработную плату окончательно включают оплату групповой жизни, пособий по инвалидности, зрению и стоматологическому страхованию.Для предприятий с кодом NAICS 72 ( Услуги по размещению и питанию) сумма увеличивается до 3,5-кратных ежемесячных расходов на заработную плату . Это зависит от года, предшествующего вашей кредитной заявке, или календарного 2019 года (так же, как PPP1), но не более 2 миллионов долларов США. К сезонным работодателям применяются особые правила, которые теперь определены в Законе. Кроме того, применяется особое правило, если вы отключили PPP1 в течение последних 90 дней. |
Правила присоединения | Отказ от участия в PPP2 для определения права на участие. |
Покрытый период | Выберите период не менее 8 недель и не более 24 недель. Определенные временные ограничения перенесены с 31 декабря 2020 г. на 31 марта 2021 г. |
Квалифицированные расходы | То же, что и PPP1, и включает расходы на заработную плату, ипотеку, арендную плату (особые правила для связанных сторон), коммунальные услуги и теперь покрытые эксплуатационные расходы, материальный ущерб, покрытые расходы поставщика и покрытые гарантии защиты работников. Как и в первом раунде, не менее 60% должно быть потрачено на оплату труда. |
Уменьшение прощения ссуды | Уменьшение прощения ссуды по сравнению с PPP1 по-прежнему применяется, то есть сокращение количества сотрудников и уменьшение выплачиваемой заработной платы более чем на 25% уменьшит размер прощения ссуды. Безопасные гавани также действуют. |
Приоритизация малообеспеченных сообществ | Администрации поручается выпустить руководство по устранению препятствий для доступа к капиталу для недостаточно обслуживаемых сообществ не позднее, чем через 10 дней после вступления в силу. |
Ограничения на участие | К неприемлемым организациям относятся:
|
Более подробную информацию об изменениях в прощении ссуд ГЧП и ссудах второго розыгрыша ГЧП можно найти в резюме Палаты представителей положений Закона о дополнительных ассигнованиях на борьбу с коронавирусом и помощи: https://apppriations.house.gov /sites/democrats.apppriations.house.gov/files/Summary%20of%20H.R.%20133%20Coronavirus%20Relief%20Provisions.pdf
Целевая группаAAFCPA по COVID-19 будет продолжать предоставлять рекомендации и ценные советы по мере появления дополнительной информации о ГЧП и других программах финансовой помощи.Если у вас есть какие-либо вопросы, обращайтесь к Бриттани Беслер, MBA, CPA, Esq. по телефону 774.512.9001, [email protected]; Карла МакКолл, бухгалтер, CGMA, 774.512.4049, [email protected]; или ваш партнер AAFCPA.
Об авторах
Бретань обладает уникальным сочетанием налогового, юридического и делового опыта и является ценным членом налоговой практики AAFCPA. Она предоставляет решения по налоговому планированию, исследованиям и соблюдению нормативных требований для корпораций, партнерств, некоммерческих организаций, частных лиц, поместий и трастов.Бриттани консультирует предприятия и частных лиц по различным вопросам, связанным с налогами на федеральном, государственном, местном и иностранном уровнях, в том числе консультирует клиентов по вопросам последствий нового и обновленного налогового законодательства. Она помогает клиентам в создании соответствующих и оптимальных организационных структур, а также консультирует по вопросам налогового планирования и соблюдения налоговых льгот. Она консультирует недавно созданных и хорошо зарекомендовавших себя некоммерческих клиентов по вопросам соблюдения требований различных государственных органов, включая правила IRS по сбору средств и политической деятельности.
Карла — управляющий партнер AAFCPA, консалтинговой и бухгалтерской фирмы на 240 человек с офисами в Бостоне, Вестборо и Уэлсли, Массачусетс. Она специализируется на предоставлении услуг по страхованию, налогообложению и бизнес-консалтингу для сложных некоммерческих организаций, в том числе: мультисервисных поставщиков социальных и социальных услуг, поставщиков психиатрических услуг, организаций искусства и культуры, фондов и учреждений, предоставляющих гранты.
Информация, содержащаяся в данном документе, носит общий характер и не предназначена и не должна рассматриваться как юридическая, бухгалтерская или налоговая консультация или мнение, предоставляемое AAFCPA пользователю.Пользователь также предупрежден о том, что этот материал может быть неприменим или не подходить для конкретных обстоятельств или потребностей пользователя и может потребовать рассмотрения неналоговых и других факторов, если предполагается какое-либо действие. Пользователь должен связаться со своим консультантом AAFCPA, прежде чем предпринимать какие-либо действия на основе этой информации. AAFCPA не берет на себя никаких обязательств по информированию читателя об изменениях или других факторах, которые могут повлиять на информацию, содержащуюся в данном документе.
Категории
Автор
Промышленность
Решение
О AAFCPA
Нормативные предупреждения
RDP Protection, Stop Brute-Force Attacks on RDP, POP3, FTP, SMTP, IMAP, MSSQL, MySQL, VoIP / SIP.Fail2Ban для Windows. Остановите RDP, MSSQL, FTP-атаки методом перебора на ваш Windows Server. Защита служб терминалов.
RdpGuard — это хост-система предотвращения вторжений (HIPS), которая защищает ваш Windows Server от атаки методом перебора на различные протоколы и службы (RDP, FTP, IMAP, POP3, SMTP, MySQL, MS-SQL, IIS Web Login, Веб-формы ASP.NET, MS Exchange, веб-доступ к удаленным рабочим столам, VoIP / SIP и т. Д.).
Он отслеживает журналы на вашем сервере и обнаруживает неудачные попытки входа в систему.Если количество неудачных попыток входа с одного IP-адреса достигает установленного предела, IP-адрес злоумышленника будет заблокирован на определенный период времени.
Скачать RdpGuard 7.0.3 Бесплатная пробная версия
Для Windows Vista / 7/8 / 8.1 / 10 и Windows Server 2003/2008/2012/2016/2019
IP-адреса злоумышленников автоматически блокируются.Щелкните изображение, чтобы просмотреть другие снимки экрана.
Почему вам это нужно?
Многие машины с Windows Server подвергаются постоянной атаке . Сетевые сканеры и инструменты перебора RDP работают круглосуточно и без выходных. В конце концов они могут найти пароль для доступа к вашему серверу! Более того, атаки методом перебора RDP злоупотребляют ресурсами сервера (ЦП, ОЗУ, дисковое пространство и пропускная способность сети).
Взгляните на журнал событий безопасности вашего сервера. Сколько неудачных попыток входа вы видите? В журнале могут быть отмечены тысячи неудачных попыток входа с одного IP-адреса. Это означает, что кто-то пытается найти пароль для доступа к вашему серверу .
Так выглядит атака методом перебора RDP в журнале событий безопасности.
Как вы можете защитить свой сервер от атак методом подбора пароля по протоколу RDP? Ответ RdpGuard — мощный инструмент, позволяющий защитить удаленный рабочий стол от атак методом перебора.
RdpGuard работает как служба Windows. Ваш Windows Server будет защищен, даже если никто не вошел в систему.
IP-адрес злоумышленника автоматически блокируется брандмауэром.
Скачать RdpGuard 7.0.3
Для Windows Vista / 7/8 / 8.1 / 10 и Windows Server 2003/2008/2012/2016/2019
09 сентября 2020 г .— RdpGuard, версия 7.0.3 Выпущено
- Технический выпуск
- Улучшенная поддержка IPv6
- Оптимизация IPCloud
- Улучшения и исправления ошибок для функции белого списка
- Улучшения диагностики и ведения журнала
- Другие мелкие улучшения и исправления ошибок
23 июня 2020 г. Выпущен RdpGuard версии 6.9.7
- Добавлена поддержка Axigen Mail Server
- Добавлена поддержка плагинов
- Улучшен анализатор журнала MS Exchange (определение формата журнала)
- Другие внутренние улучшения и исправления ошибок
08 апреля 2020 г. — RdpGuard версии 6.8.9 Выпущено
- Технический выпуск
- Улучшенная поддержка почтового сервера Kerio Connect
- Исправлена доступность IPCloud для Windows Server 2003
- Исправлена проблема с преждевременным истечением пробного периода
- Исправлена проблема пользовательского интерфейса с панелью нумерации страниц
- Другие незначительные улучшения и ошибки -фиксирует
Рейтинг | Зона | Доступ | % | байт | % | Посещений | % |
---|---|---|---|---|---|---|---|
1 | паук-95-108-217-251.yandex.com | 6,439 | 16,32 | 1 952 373 | 0,15 | 39 | 1,42 |
2 | zvm27 | 2 887 | 7,32 | 21 666 018 | 1,69 | 83 | 3,01 |
3 | entrata.defa.ru | 751 | 1,90 | 13,300,264 | 1,03 | 9 | 0.33 |
4 | 423ob.scansafe.net | 550 | 1,39 | 16,681,447 | 1,30 | 104 | 3,78 |
5 | 422ob.scansafe.net | 422 | 1,07 | 16 386 139 | 1,27 | 63 | 2,29 |
6 | 84.204.208.166 | 415 | 1,05 | 13 542 529 | 1.05 | 7 | 0,25 |
7 | широкополосный-46-188-27-2.2com.net | 392 | 0,99 | 19 412 702 | 1,51 | 15 | 0,54 |
8 | static-customer-77-43-141-238.perm.comstar-r.ru | 362 | 0,92 | 14 963 916 | 1,16 | 13 | 0,47 |
9 | 80.248.108.20 | 338 | 0,86 | 8 614 327 | 0,67 | 2 | 0,07 |
10 | 31.45.241.64 | 334 | 0,85 | 13 100 283 | 1,02 | 6 | 0,22 |
11 | 001135.connecto.tv | 289 | 0,73 | 11 072 125 | 0,86 | 2 | 0.07 |
12 | interfax11.tel.ru | 286 | 0,73 | 2,446,839 | 0,19 | 144 | 5,23 |
13 | 193.34.164.204 | 237 | 0,60 | 8,753,101 | 0,68 | 11 | 0,40 |
14 | mail.belkam.com | 234 | 0,59 | 27 611 032 | 2.15 | 7 | 0,25 |
15 | client.yota.ru | 226 | 0,57 | 5 442 061 | 0,42 | 5 | 0,18 |
16 | 92.50.163.158.static.ufanet.ru | 224 | 0,57 | 9 757 639 | 0,76 | 3 | 0,11 |
17 | 178.236.241.195 | 219 | 0.56 | 4 279 977 | 0,33 | 1 | 0,04 |
18 | 188.19.105.179 | 212 | 0,54 | 122 994 | 0,01 | 15 | 0,54 |
19 | 195.239.26.158 | 206 | 0,52 | 3 908 495 | 0,30 | 1 | 0,04 |
20 | gbedcz03fwb-global1.mmc.com | 198 | 0,50 | 7 400 010 | 0,58 | 1 | 0,04 |
21 | 77.66.181.42 | 184 | 0,47 | 6 056 955 | 0,47 | 8 | 0,29 |
22 | 217.23.180.102 | 179 | 0,45 | 7,192,154 | 0,56 | 7 | 0.25 |
23 | sloan2.ut.mephi.ru | 174 | 0,44 | 8 095 329 | 0,63 | 1 | 0,04 |
24 | 212,58,47,2 | 172 | 0,44 | 8 379 562 | 0,65 | 3 | 0,11 |
25 | n07-06-07.opera-mini.net | 160 | 0,41 | 3 932 446 | 0.31 | 1 | 0,04 |
26 | 124.gprs.mts.ru | 158 | 0,40 | 7 787 188 | 0,61 | 5 | 0,18 |
27 | недоступен | 154 | 0,39 | 5,389,243 | 0,42 | 8 | 0,29 |
28 | porvu.gazprombank.ru | 153 | 0.39 | 5 283 786 | 0,41 | 2 | 0,07 |
29 | 77.239.205.99 | 152 | 0,39 | 2,397,074 | 0,19 | 3 | 0,11 |
30 | широкополосный доступ в Интернет-109-173-63-184.nationalcablenetworks.ru | 152 | 0,39 | 6,105,117 | 0,47 | 4 | 0,15 |
31 | net76.186.188-44.tmn.ertelecom.ru | 152 | 0,39 | 5,108,406 | 0,40 | 3 | 0,11 |
32 | 91.215.191.2 | 149 | 0,38 | 5 969 432 | 0,46 | 6 | 0,22 |
33 | b-audit.ttknet.ru | 144 | 0,37 | 6 475 081 | 0,50 | 3 | 0.11 |
34 | 46.158.144.55 | 140 | 0,35 | 5 361 482 | 0,42 | 1 | 0,04 |
35 | 5.140.235.213 | 140 | 0,35 | 5,230,950 | 0,41 | 4 | 0,15 |
36 | 83.149.34.163 | 136 | 0,34 | 36 762 381 | 2.86 | 2 | 0,07 |
37 | 194,33,79,1 | 135 | 0,34 | 794 046 | 0,06 | 4 | 0,15 |
38 | ppp1-prm1-3.relan.ru | 135 | 0,34 | 5 624 511 | 0,44 | 4 | 0,15 |
39 | 89.gprs.mts.ru | 135 | 0.34 | 5 393 178 | 0,42 | 2 | 0,07 |
40 | gw.aldisgroup.ru | 133 | 0,34 | 4,993,571 | 0,39 | 1 | 0,04 |
41 | 95.105.39.179.dynamic.ufanet.ru | 131 | 0,33 | 3,742,218 | 0,29 | 9 | 0,33 |
42 | нат-176-100-246-240.masterbit.su | 131 | 0,33 | 2 941 845 | 0,23 | 13 | 0,47 |
43 | 62.168.241.122 | 127 | 0,32 | 5,402,430 | 0,42 | 2 | 0,07 |
44 | 89.175.165.237 | 127 | 0,32 | 4 301 422 | 0,33 | 1 | 0.04 |
45 | n12-01-02.opera-mini.net | 126 | 0,32 | 8,300,916 | 0,65 | 1 | 0,04 |
46 | 421ob.scansafe.net | 122 | 0,31 | 2 991 923 | 0,23 | 23 | 0,84 |
47 | mail.ruspetro.com | 121 | 0,31 | 5 209 074 | 0.41 | 2 | 0,07 |
48 | a147.sub102.net78.udm.net | 120 | 0,30 | 5,152,922 | 0,40 | 5 | 0,18 |
49 | 176.14.219.54 | 119 | 0,30 | 4 258 518 | 0,33 | 2 | 0,07 |
50 | 62.105.155.122 | 118 | 0.30 | 6,138,548 | 0,48 | 5 | 0,18 |
006.popsite.net 008.popsite.net 015.popsite.net 020.popsite.net 021.popsite.net 024.popsite.net 027.popsite.net 032.popsite.net 033.popsite.net 036.popsite.net 038.popsite.net 039.popsite.net 046.popsite.net 050.popsite.net 056.popsite.net 057.popsite.net 064.popsite.net 068.popsite.net 075.popsite.net 076.popsite.net 099.popsite.net 104.popsite.net 121.popsite.net 125.попсайт.сеть 128.popsite.net 136.popsite.net 138.popsite.net 142.popsite.net 148.popsite.net 155.popsite.net 158.popsite.net 161.popsite.net 187.popsite.net 190.popsite.net 20-151.libero.it 24-151.libero.it 25-151.libero.it 26-151.libero.it 27-151.libero.it 28-151.libero.it 29-151.libero.it 30-151.libero.it 31-151.libero.it 56k.execulink.com 5800-12.telinco.net 5800-13.telinco.net 5800-14.telinco.net 751.popsite.net 752.popsite.net 98-62.inwind.it Dial.Boston1.Level3.net Dial1.Atlanta1.Level3.net Наберите 1. Бирмингем1.Level3.net Dial1.Boston1.Level3.net Dial1.Chicago1.Level3.net Dial1.Cincinnati1.Level3.net Dial1.Cleveland1.Level3.net Dial1.Dallas1.Level3.net Наберите1.Denver1.Level3.net Dial1.Detroit1.Level3.net Dial1.Houston1.Level3.net Dial1.Indianapolis1.Level3.net Dial1.KansasCity1.Level3.net Dial1.LasVegas1.Level3.net Dial1.LosAngeles1.Level3.net Dial1.Louisville1.Level3.net Dial1.Manchester1.Level3.net Dial1.Miami1.Level3.net Наберите1.NewYork1.Level3.net Dial1.Orlando1.Level3.net Dial1.Philadelphia1.Level3.net Наберите 1.Phoenix1.Level3.net Dial1.SaintLouis1.Level3.net Dial1.SaltLakeCity1.Level3.net Dial1.SanDiego1.Level3.net Dial1.SanFrancisco1.Level3.net Dial1.SanJose1.Level3.net Dial1.Seattle1.Level3.net Dial1.StLouis1.Level3.net Dial1.Stamford1.Level3.net Dial1.Washington1.Level3.net Dial1.Washington2.Level3.net Dial1.Weehawken1.Level3.net a.pppool.de access.uk.tiscali.com access1.zetcom.net.ru aep.bellsouth.net anc-dial.gci.net ap.plala.or.jp as.wcom.net asm.bellsouth.net ath.bellsouth.net atldial1.hawkcommunications.ком atlnga1.dsl-verizon.net b.pppool.de bchsia.telus.net bct.bellsouth.net bhm.bellsouth.net bna.bellsouth.net c.ppp-pool.de c.pppool.de cas-tor.golden.net catv-pool.axelero.hu champaign-il.egix.net charleston-il.egix.net chs.bellsouth.net cvx1.telinco.net cvx2.telinco.net cvx3.telinco.net cvx4.telinco.net cvx5.telinco.net cvx6.telinco.net cvx7.telinco.net cvx8.telinco.net d-ip.magma.ca d.pppool.de d0.club-internet.fr d1.club-internet.fr d2.club-internet.fr d3.club-internet.fr d4.club-internet.fr даqwest.net da.uu.net dab.bellsouth.net dhcp4.washington.edu dia.cust.qwest.net dia.uniroma3.it dial-access.att.net dial-d.telecom.sk dial-in.hispeed.ch dial-in.ttnet.net.tr dial-in1.gb.athenet.net dial-pool.digitelone.com dial-up.arnes.si dial-up.cnt.ru dial-up.estaminas.com.br dial-up.hereintown.net dial-up.kht.ru dial-up.kraft-s.ru dial-up.siol.net dial-up.telesp.net.br dial-up.tutopia.spo.ifxnetworks.com.br dial-up.uoc.gr dial-up.volja.net dial.123.net dial.12move.nl dial.InfoSky.Net dial.aic.net набирать номер.airstreamcomm.net dial.allstream.net dial.aloha.net dial.avtlg.ru dial.bendery.md dial.blm.embratel.net.br dial.bluewin.ch dial.brasiltelecom.net.br dial.bright.net dial.brightok.net dial.com.au dial.cpe.embratel.net.br dial.cust.tie.cl dial.cvx01.knor.blueyonder.co.uk dial.cvx02.wolv.blueyonder.co.uk dial.de.colt.net dial.de.easynet.net dial.de.ignite.net dial.eclipse.net dial.entanet.co.uk dial.euronet.nl dial.fla.embratel.net.br dial.flow.com.au dial.freestart.hu dial.freesurf.nl dial.froggy.com.au dial.global.net.uk dial.gorge.net dial.hawaiilink.net dial.hccnet.nl dial.hetnet.nl dial.hexcom.net dial.hickorytech.net dial.ilhawaii.net dial.indiana.edu dial.inet.fi dial.ipervia.it dial.kabelfoon.nl dial.kolumbus.fi dial.kuban.su dial.maqs.net dial.matav.net dial.maui.net dial.mels.ru dial.metalink.net dial.mhtc.net dial.mi.ru dial.mtl1.uunet.ca dial.mts.net dial.mweb.co.za dial.net.mx dial.net.telekom.hu dial.net4b.pt dial.netline.net.uk dial.netsi.net dial.nildram.co.uk dial.nortenet.pt набирать номер.ntli.net dial.onda.com.br dial.online.kz dial.optilinkcomm.net dial.planet.nl dial.pop1.wanet.com dial.proxad.net dial.qcinet.net dial.qnet.com dial.rce.embratel.net.br dial.relia.net dial.ripnet.com dial.rjo.embratel.net.br dial.rjoac.embratel.net.br dial.rol.ru dial.rpa.net dial.s-net.net.ua dial.sdr.embratel.net.br dial.seidata.com dial.sovam.com dial.telebrasilia.net.br dial.telus.net dial.terra.cl dial.thm.netdirect-online.co.uk dial.tiscali.nl dial.tor.accessv.com dial.tor2.uunet.ca dial.tpo.фи dial.tvc-ip.com dial.txcyber.com dial.umd.edu dial.univie.ac.at dial.unm.edu dial.up.net dial.usertools.net dial.utk.ru dial.virgin.net dial.vlink.ru dial.vsi.ru dial.vta.embratel.net.br dial.wanadoo.nl dial.webound.com dial.wxs.nl dial.xs4all.nl dial.xtelegent.net dial1.sne.nac.net dial2.planet.it dial2.sne.nac.net dial213.almaty.idc.kz dial3.sne.nac.net dial4.jtfreesurf.co.uk dial4.sne.nac.net dial5.planet.it dialdata.com.br dialin.a-315.westelcom.com dialin.alt.ru dialin.buffalo.edu Ввести номер.datanet.hu dialin.enternet.hu dialin.hansenet.de dialin.heagmedianet.de dialin.iskon.hr dialin.iupui.edu dialin.uic.edu dialin.uni-bonn.de dialin.westelcom.com dialins.utoledo.edu dialinx.net dialip.mich.net dialip.rit.edu dialne.bright.net dialnetwork.pavilion.co.uk dialroam.rr.com dialsprint.net dialup-a.mari-el.ru dialup-stud.ethz.ch dialup.20922344.fastraxs.net dialup.accessus.net dialup.alianzaviva.net dialup.alkar.net dialup.amis.net dialup.anhm01.pacbell.net dialup.applwi.ameritech.net набрать номер.asvt.ru dialup.atnet.ru dialup.austtx.swbell.net dialup.bcvloh.ameritech.net dialup.blic.net dialup.bltnin.ameritech.net dialup.bol.ucla.edu dialup.bumttx.swbell.net dialup.ca.telus.com dialup.canada.psi.net dialup.candw.ky dialup.carrollsweb.com dialup.cavtel.net dialup.cetlink.net dialup.chcgil.ameritech.net dialup.cityline.ru dialup.cl.spb.ru dialup.claranet.fr dialup.clear.net.nz dialup.coastalnow.net dialup.comset.net dialup.connect.net.au dialup.conninc.com dialup.corbina.ru dialup.cornell.edu dialup.crchtx.swbell.net dialup.ctm.net dialup.cust.tie.cl dialup.dandy.net dialup.dn.farlep.net dialup.dytnoh.ameritech.net dialup.ecol.net dialup.edisontel.com dialup.elpstx.swbell.net dialup.elvisti.kiev.ua dialup.enter.net dialup.eol.ca dialup.eulstx.swbell.net dialup.eurocom.od.ua dialup.farlep.net dialup.foxinternet.com dialup.freesurf.fr dialup.frsnca.pacbell.net dialup.fsr.net dialup.fyvlar.swbell.net dialup.g4.net dialup.georgetown.edu dialup.gil.com.au dialup.glazov.net dialup.gulftelephone.сеть dialup.gvt.net.br dialup.hiwaay.net dialup.hstntx.swbell.net dialup.i4surf.net dialup.iam.net.ma dialup.inetcomm.ru dialup.inetia.pl dialup.infocom.ph dialup.innercite.com dialup.interdacom.ru dialup.iol.cz dialup.iowatelecom.net dialup.ipltin.ameritech.net dialup.iptcom.net dialup.irvnca.pacbell.net dialup.itte.kz dialup.jlc.net dialup.kh.velton.ua dialup.kiev.farlep.net dialup.kirov.ru dialup.klmzmi.ameritech.net dialup.ksc2mo.swbell.net dialup.kscymo.swbell.net dialup.ktk.ru dialup.lanck.net набрать номер.lineone.co.uk dialup.lviv.farlep.net dialup.mana.pf dialup.mar.shreve.net dialup.mari-el.ru dialup.mart.ru dialup.master.ru dialup.mcttelecom.com dialup.mdsnwi.ameritech.net dialup.metrocom.ru dialup.mgts.by dialup.milwwi.ameritech.net dialup.mindspring.com dialup.mplik.ru dialup.ms.odessa.ua dialup.mts-nn.ru dialup.mtu-net.ru dialup.nanosecond.com dialup.nauticom.net dialup.neteze.com dialup.nethere.net dialup.netins.net dialup.netizen.com.ar dialup.nhwd02.pacbell.net dialup.nid.ru dialup.nuria.telefonica-data.net dialup.o1.com dialup.okcyok.swbell.net dialup.onego.ru dialup.online.ge dialup.online.no dialup.optusnet.com.au dialup.orc.ru dialup.orel.ru dialup.peknil.grics.net dialup.peoril.ameritech.net dialup.permonline.ru dialup.peterlink.ru dialup.planetinternet.be dialup.pltn13.pacbell.net dialup.pol.co.uk dialup.primorye.ru dialup.ques.abccom.bc.ca dialup.rcn.com dialup.rcom.ru dialup.rcsntx.swbell.net dialup.relline.ru dialup.renocs.nvbell.net dialup.rjo.infolink.com.br dialup.sampo.RU dialup.sbndin.ameritech.net dialup.scrm01.pacbell.net dialup.seanet.com dialup.seed.net.tw dialup.serenacom.it dialup.sfldmi.ameritech.net dialup.sgnwmi.ameritech.net dialup.shasta.com dialup.skt2ca.pacbell.net dialup.sktn01.pacbell.net dialup.sky.od.ua dialup.skynet.be dialup.snantx.swbell.net dialup.sndg02.pacbell.net dialup.snfc21.pacbell.net dialup.snrf01.pacbell.net dialup.sntc01.pacbell.net dialup.spfdil.ameritech.net dialup.spfdmo.swbell.net dialup.srt.com dialup.srtnet.com dialup.stlsmo.swbell.net dialup.sunbeach.net dialup.sunysb.edu dialup.surf724.com dialup.surfnett.de dialup.surnet.cl dialup.surnet.ru dialup.takas.lt dialup.telecet.ru dialup.telenergo.pl dialup.tiscali.it dialup.tiscalinet.it dialup.tns.net dialup.tomica.ru dialup.tula.net dialup.tulsok.swbell.net dialup.ucalgary.ca dialup.ufl.edu dialup.ukr.net dialup.umbc.edu dialup.umn.edu dialup.uni2.es dialup.uth.gr dialup.versatel.nl dialup.vol.cz dialup.wacotx.swbell.net dialup.wisc.edu dialup.wotnoh.ameritech.net набрать номер.wplus.net dialup.wvnet.edu dialup.xtra.co.nz dialup.zeos.net dialup.ziplink.net dialup.zonnet.nl dialup.zoo.co.uk dialup1.nnt.ru dialup2.nnt.ru dialupat.pennswoods.net dialups.lnxnet.net dialups.netsource.ie dip.t-dialin.net dip0.t-ipconnect.de dipool.highway.telekom.at du.internet.is dup.prima.net.ar dy.bbexcite.jp dyn-ip.spb.skylink.ru dyn.aci.on.ca dyn.atlantic.net dyn.centurytel.net dyn.cm.kabsi.at dyn.columbia.edu dyn.dotnet.com dyn.embarqhsd.net dyn.everestkc.net dyn.gotadsl.co.uk dyn.grandecom.сеть dyn.grandenetworks.net dyn.iinet.net.au dyn.mipops.com dyn.nic.fi dyn.optonline.net dyn.pacific.net.au dyn.pacific.net.hk dyn.paonline.com dyn.personainc.net dyn.salzburg-online.at dyn.song.fi dyn.sprint-hsd.net dyn.sth.bostream.se dyn.telerama.com dyn.tyfon.se dyn.ufamts.ru dyn.unipg.it dyn10.pacific.net.au dyn101.pacific.net.sg dyn109.pacific.net.sg dyn114.pacific.net.sg dyn127.pacific.net.sg dyn15.pacific.net.hk dyn176.pacific.net.hk dyn202.pacific.net.sg dyn225.apogeetelecom.com dyn228.apogeetelecom.ком dyn228.pacific.net.au dyn241.pacific.net.ph dyn248b.pacific.net.au dyn249.pacific.net.au dyn66.pacific.net.sg dyn67.pacific.net.sg dyn68.pacific.net.sg dyn69.pacific.net.sg dyn70.pacific.net.sg dyn72.pacific.net.sg dyn73.pacific.net.sg dyn74.pacific.net.sg dyn75.pacific.net.sg dyn76.pacific.net.sg dyn77.pacific.net.sg dyn79.pacific.net.sg dyn80.pacific.net.sg dyn81.pacific.net.sg dyn82.pacific.net.sg dyn83.pacific.net.sg dyn84.pacific.net.sg dyn85.pacific.net.sg dyn86.pacific.net.sg dyn87.pacific.net.sg dyn88.pacific.net.sg dyn89.pacific.net.sg dyn90.pacific.net.sg dyn91.pacific.net.sg dyn92.pacific.net.sg dyn93.pacific.net.sg dyn94.pacific.net.sg dyn95.pacific.net.sg dyn96.pacific.net.sg dyn97.pacific.net.sg dynamic-athome.inode.at dynamic-dialup.coretel.net dynamic.163data.com.cn dynamic.adsl-line.inode.at dynamic.amis.net dynamic.apol.com.tw dynamic.barak-online.net dynamic.brdterra.com.br dynamic.caiway.nl dynamic.cndata.com dynamic.covad.net dynamic.dedicado.com.uy dynamic.dejazzd.com динамический.dial.as9105.com dynamic.dialterra.com.br dynamic.dsl.as9105.com dynamic.dsl.t-2.net dynamic.easy-up.net.tw dynamic.eatel.net dynamic.giga.net.tw dynamic.hinet.net dynamic.jx.zj.cndata.com dynamic.ls.zj.cndata.com dynamic.mnet-online.de dynamic.msstate.edu dynamic.mts.net dynamic.onl.ru dynamic.orange.es dynamic.oregonstate.edu dynamic.primacom.net dynamic.qsc.de dynamic.qz.zj.cndata.com dynamic.sbb.co.yu dynamic.seed.net.tw dynamic.sig.com.tw dynamic.so-net.net.tw dynamic.tfn.net.tw динамические.тики.ne.jp dynamic.ttn.net dynamic.tz.zj.cndata.com dynamic.ucsd.edu dynamic.uni2.es dynamic.visi.com dynamic.ziplink.net dynamic.zs.zj.cndata.com dynamicIP.rima-tde.net dyndsl.versatel.nl dynip.nus.edu.sg dynow.sdi.tpnet.pl e.pppool.de east.verizon.net f.ppp-pool.de f.pppool.de fios.verizon.net fl-dyn.sprint-hsd.net fll.bellsouth.net fulton-dialup.midamerica.net g.pppool.de go.retevision.es gsp.bellsouth.net h.pppool.de hg.mdip.bt.net hnllhi1.dsl-verizon.net host10.starman.ee host13.starman.ee host14.starman.ee host15.starman.ee host17.starman.ee host18.starman.ee host2.starman.ee host20.starman.ee host22.starman.ee host25.starman.ee host28.starman.ee host30.starman.ee host33.starman.ee host34.starman.ee host38.starman.ee host4.starman.ee host40.starman.ee host41.starman.ee host42.starman.ee host43.starman.ee host49.starman.ee host5.starman.ee host9.starman.ee hsia.telus.net hsinchu-dial.pagic.net i.pppool.de ida.starman.ee in-addr.btopenworld.com int.bellsouth.net ip.alltel.net ip.ricochet.net ippool.ndo.com ipt.aol.com j.pppool.de jan.bellsouth.net k.pppool.de l.pppool.de lsanca1.dsl-verizon.net lsn.starman.ee m.ppp-pool.de m.pppool.de mclass.broadwing.net mem.bellsouth.net mia.bellsouth.net mis.prserv.net mnl.skyinet.net mob.bellsouth.net modem-pool.kuban.ru modem.cust.winbeam.com n.club-internet.fr n.pppool.de nap.wideopenwest.com natpool.uc.edu nb.aliant.net ny.superior.net o.pppool.de p.pppool.de pm3-3.intergate.ca pool-123.spbnit.ru pool.007mundo.com pool.bol.bg pool.broadband.ntl.com бассейн.dataforce.net pool.einsundeins.de pool.eol.hu pool.fctv.ne.jp pool.invitel.hu pool.kaluga.ru pool.mediaways.net pool.pro-lan.net pool.starband.net pool.t-online.hu pool.terralink.de pool.ukrtel.net pool1.iwakuni.attmil.ne.jp pool1.sasebo.attmil.ne.jp pool10316.interbusiness.it pool10716.interbusiness.it бассейн14616.interbusiness.it pool15199.interbusiness.it pool194184.interbusiness.it pool194243.interbusiness.it pool195103.interbusiness.it pool195223.interbusiness.it pool19531.interbusiness.it бассейн212171.interbusiness.it pool212210.interbusiness.it pool21326.interbusiness.it pool21345.interbusiness.it pool21382.interbusiness.it pool217141.interbusiness.it pool217172.interbusiness.it pool217222.interbusiness.it pool217223.interbusiness.it pool21756.interbusiness.it pool21757.interbusiness.it pool21758.interbusiness.it pool21759.interbusiness.it бассейн22816.interbusiness.it бассейн23616.interbusiness.it pool3.ftthosaka.att.ne.jp pool4.ftthosaka.att.ne.jp pool62110.interbusiness.it pool62133.interbusiness.Это pool62211.interbusiness.it pool80104.interbusiness.it pool80105.interbusiness.it бассейн80116.interbusiness.it pool80117.interbusiness.it pool8016.interbusiness.it pool8017.interbusiness.it pool8018.interbusiness.it бассейн80180.interbusiness.it pool80181.interbusiness.it pool80182.interbusiness.it pool80183.interbusiness.it pool8020.interbusiness.it бассейн80204.interbusiness.it бассейн80205.interbusiness.it бассейн80206.interbusiness.it pool80207.interbusiness.it pool8021.interbusiness.it pool8022.interbusiness.Это pool8023.interbusiness.it pool81112.interbusiness.it pool81113.interbusiness.it pool81114.interbusiness.it pool81115.interbusiness.it pool81116.interbusiness.it pool81117.interbusiness.it pool81118.interbusiness.it pool81119.interbusiness.it pool81120.interbusiness.it pool81121.interbusiness.it pool81122.interbusiness.it бассейн81123.interbusiness.it бассейн81125.interbusiness.it pool8172.interbusiness.it pool8173.interbusiness.it pool8174.interbusiness.it pool8175.interbusiness.it pool82104.interbusiness.Это pool82105.interbusiness.it бассейн82106.interbusiness.it pool82107.interbusiness.it бассейн82184.interbusiness.it бассейн82185.interbusiness.it бассейн82186.interbusiness.it pool82187.interbusiness.it pool82188.interbusiness.it pool82189.interbusiness.it бассейн82190.interbusiness.it pool82191.interbusiness.it pool8248.interbusiness.it pool8249.interbusiness.it pool8250.interbusiness.it pool8251.interbusiness.it pool8252.interbusiness.it pool8253.interbusiness.it pool8254.interbusiness.it pool8255.interbusiness.Это pool8256.interbusiness.it pool8257.interbusiness.it pool8258.interbusiness.it pool8259.interbusiness.it pool8260.interbusiness.it pool8261.interbusiness.it pool8263.interbusiness.it pool8288.interbusiness.it pool8289.interbusiness.it pool8290.interbusiness.it pool8291.interbusiness.it pool8532.interbusiness.it pool8533.interbusiness.it pool8534.interbusiness.it pool8535.interbusiness.it pool8536.interbusiness.it pool8537.interbusiness.it pool8538.interbusiness.it pool8539.interbusiness.it бассейн8540.interbusiness.it pool8541.interbusiness.it pool8542.interbusiness.it pool8543.interbusiness.it pool8544.interbusiness.it pool8545.interbusiness.it pool8546.interbusiness.it pool8547.interbusiness.it pool870.interbusiness.it pool871.interbusiness.it pool8710.interbusiness.it pool8711.interbusiness.it pool8712.interbusiness.it pool8714.interbusiness.it pool8715.interbusiness.it pool8716.interbusiness.it pool8717.interbusiness.it pool872.interbusiness.it pool8728.interbusiness.it pool8729.interbusiness.Это pool873.interbusiness.it pool8730.interbusiness.it pool874.interbusiness.it pool875.interbusiness.it pool876.interbusiness.it pool877.interbusiness.it pool878.interbusiness.it pool879.interbusiness.it pool8832.interbusiness.it pool8833.interbusiness.it pool8834.interbusiness.it pool8835.interbusiness.it pool8836.interbusiness.it pool8837.interbusiness.it pool8838.interbusiness.it pool8839.interbusiness.it pool8840.interbusiness.it pool8841.interbusiness.it pool8842.interbusiness.it poolbrx.francetelecom.сеть pooled.umbc.edu pooles.rima-tde.net pool.arcor-ip.net ppp-bb.dion.ne.jp ppp-pool.tvnetwork.hu ppp.as12876.net ppp.asahi-net.or.jp ppp.bngr.epix.net ppp.brasiltelecom.net.br ppp.clsm.epix.net ppp.cybercity.dk ppp.dion.ne.jp ppp.ezvl.epix.net ppp.fcc.net ppp.get2net.dk ppp.hlst.epix.net ppp.idknet.com ppp.infoweb.ne.jp ppp.kapta.ru ppp.kmv.ru ppp.lrz-muenchen.de ppp.mpinet.net ppp.mtrs.epix.net ppp.netpci.com ppp.netsville.net ppp.northrock.bm ppp.odn.ad.jp ppp.onetel.net.uk ppp.oregonstate.edu ppp.oricom.ca ppp.pclk.epix.net ppp.prin.ne.jp ppp.qrvl.epix.net ppp.smu.edu ppp.sovintel.spb.ru ppp.svcr.epix.net ppp.telenordia.se ppp.tiscali.fr ppp.tpnet.pl ppp.u-netsurf.ne.jp ppp.ucc-net.ca ppp.wakwak.ne.jp ppp.wlbo.epix.net ppp1-2.sg-b.tiscali.no ppp11.odn.ad.jp ppp117157.cyberway.com.sg ppp12.odn.ad.jp ppp120.cyberway.com.sg ppp121.cyberway.com.sg ppp122.cyberway.com.sg ppp123.cyberway.com.sg ppp124.cyberway.com.sg ppp125.cyberway.com.sg ppp126.cyberway.com.sg ppp127.cyberway.com.sg ppp128.cyberway.com.sg ppp129.cyberway.com.sg ppp130.cyberway.com.sg ppp131.cyberway.com.sg ppp132.cyberway.com.sg ppp133.cyberway.com.sg ppp134.cyberway.com.sg ppp15.odn.ne.jp ppp18.odn.ad.jp ppp2.cse.unsw.edu.au pppmad.vsnl.net.in pppoe.execulink.com pppoe.ihug.co.nz pppoe.inetcomm.ru pppoe.mari-el.ru pppoe.mark-itt.net pppoe.mts-nn.ru pppoe.mtu-net.ru pppoe.omsknet.ru pptp.mtu-net.ru psl.bellsouth.net q.pppool.de qc.sympatico.ca r.ppp-pool.de r.pppool.de range217-42.btcentralplus.com range217-44.btcentralplus.ком rev.o1.com revip.asianet.co.th revip2.asianet.co.th s.pppool.de sdf.bellsouth.net sea1.dsl-verizon.net shv.bellsouth.net slip.uiuc.edu spt.centurytel.net t.pppool.de temp.wsu.edu tisdip.tiscali.de tlf.dialuol.com.br tlm.dialuol.com.br tutopia-dialup.ifxnw.cl u.pppool.de uc.nombres.ttd.es uk.uudial.com us.prserv.net user.auna.net user.ono.com usr.hananet.net usuarios.retecal.es uudial.uunet.co.za v.pppool.de w.pppool.de wireless.com.py x.pppool.de xd-dynamic.ctbcnetsuper.com.br xdsl-dinamico.ctbcnetsuper.com.br y.pppool.de z.pppool.de
% PDF-1.5 % 469 0 объект > эндобдж xref 469 82 0000000016 00000 н. 0000002788 00000 н. 0000002983 00000 н. 0000003019 00000 п. 0000003478 00000 н. 0000003545 00000 н. 0000003684 00000 н. 0000003823 00000 н. 0000003960 00000 н. 0000004099 00000 н. 0000004237 00000 п. 0000004375 00000 н. 0000004487 00000 н. 0000004895 00000 н. 0000005266 00000 н. 0000005455 00000 н. 0000005847 00000 н. 0000006637 00000 н. 0000006751 00000 н. 0000007419 00000 п. 0000007456 00000 н. 0000008118 00000 п. 0000008544 00000 н. 0000008924 00000 н. 0000011384 00000 п. 0000011691 00000 п. 0000011718 00000 п. 0000011862 00000 п. 0000012187 00000 п. 0000012576 00000 п. 0000012901 00000 п. 0000013471 00000 п. 0000013967 00000 п. 0000014056 00000 п. 0000014535 00000 п. 0000404369 00000 п. 0000413054 00000 н. 0000420140 00000 н. 0000420739 00000 н. 0000420819 00000 н. 0000422414 00000 н. 0000424911 00000 п. 0000425200 00000 н. 0000425270 00000 н. 0000425430 00000 н. 0000426360 00000 н. 0000426669 00000 н. 0000427005 00000 н. 0000427603 00000 н. 0000427879 00000 н. 0000428190 00000 н. 0000429916 00000 н. 0000430239 00000 п. 0000430632 00000 н. 0000430721 00000 н. 0000430863 00000 н. 0000430952 00000 п. 0000431094 00000 н. 0000431183 00000 н. 0000431325 00000 н. 0000431389 00000 н. 0000431453 00000 н. 0000431517 00000 н. 0000431588 00000 н. 0000431784 00000 н. 0000431922 00000 н. 0000432030 00000 н. 0000432120 00000 н. 0000432186 00000 н. 0000432279 00000 н. 0000432340 00000 н. 0000432437 00000 н. 0000432500 00000 н. h, bLwvx3 [gmCs rfo_Ͱx5mr {Ao6 s_y ~ 3j wn $ /] yXfMH`; m 돯.# 8ӒXD + B «+ e * 8 # U» Vm6` «gdJqLI} 2pt7nS1Iaa
Полный журнал использования EDUCA Февраль 1996 г. Сосредоточение внимания на доступе к следующим путям или файлам: — / ro Общее количество доступов: 1108 Общее количество пользователей: 133 Общее количество байтов: По файлу ======= 92 / ro / 47 /ro/default.htm 10 /ro/izogra/vb.htm 47 /ro/izogra/vdelu.htm 1 / ro / izomon 1 / ro / izomre / 6 / ро / изомре / англ.htm 19 /ro/izomre/gradiva.htm 1 /ro/izomre/info/st10.htm 38 / ro / izomre / каталог / 6 /ro/izomre/katalog/default.htm 11 /ro/izomre/katalog/navodila.htm 6 /ro/izomre/katalog/ocena.htm 14 /ro/izomre/katalog/opis.htm 1 /ro/izomre/katalog/opis.ini 2 /ro/izomre/katalog/pregled.htm 3 /ro/izomre/katalog/prelet.htm 2 / ро / изомре / каталог / припомбе.htm 1 /ro/izomre/katalog/programi/astronom/moon.htm 2 /ro/izomre/katalog/programi/astronom/skyglobe.htm 1 /ro/izomre/katalog/programi/astronom/skyview.htm 2 /ro/izomre/katalog/programi/astronom/skyview.html 1 /ro/izomre/katalog/programi/astronom/solar.htm 7 /ro/izomre/katalog/seznam.htm 5 /ro/izomre/katalog/urednik.htm 1 /ro/izomre/katalog/zg.htm 1 / ro / izomre / katalog / zg3.htm 31 /ro/izomre/nasveti.htm 1 / ro / izomre / nasveti / 40 /ro/izomre/nasveti/latin2.htm 4 /ro/izomre/nasveti/latin2.zip 1 /ro/izomre/nasveti/ttf_font.zip 16 /ro/izomre/novice.htm 1 /ro/izomre/novice/doc/eeduc96.htm 5 /ro/izomre/novice/katalog/navodila.htm 8 /ro/izomre/novice/katalog/ocena.htm 12 / ро / изомре / новичок / каталог / опись.htm 24 /ro/izomre/novice/katalog/urednik.htm 1 /ro/izomre/novice/network.htm 4 /ro/izomre/novice/omrezje.htm 19 /ro/izomre/novice/pravila.htm 37 /ro/izomre/omrezje.htm 2 /ro/izomre/ro.htm 94 /ro/izomre/slovensk.htm 20 /ro/izomre/streznik.htm 1 /ro/izomre/streznik/prijanav.htm 10 /ro/izomre/streznik/prijava.htm 15 / ro / izomre / vodici.htm 28 /ro/izomre/vodici/ed_bmk1.htm 23 /ro/izomre/vodici/ss772.htm 6 /ro/izomre/vodici/sw_bmk1.htm 1 /ro/izomre/vodici/ukbmks.htm 1 / ro / izosli / fmon 3 / ro / izosli / ro / 20 / ro / izosli / ro / omrezje / 2 / ро / паб 1 / ro / pub / 1 / ро / паб / пт 3 / ro / pub / zip / 1 / ro / pub / zip / 1 / 1 / ro / pub / zip / 1 / mosaic20.EXE 1 /ro/pub/zip/1/ole32s13.exe 1 / ro / pub / zip / 2 / 1 /ro/pub/zip/2/mosaic20.exe 2 / ro / pub / zip / 3 / 1 /ro/pub/zip/3/mosaic20.exe 119 /ro/siobody.htm 109 /ro/siodate.htm 104 /ro/siohead.htm 1 /ro/test/k/pr.pl 1 / р / ср 3 /robots.txt По ip ===== 1 137.138.246.172 e-sp072.cern.ch 2 204.62.245.32 crimpshrine.atext.com 5 204.123.2.54 scooter.pa-x.dec.com 1 128.196.6.202 computer26.fcr.arizona.edu 1 130.206.130.133 mca0.uib.es 5 193.2.93.103 пидор 1 161.53.8.14 student.math.hr 1 194.8.12.138 stoat.riga.lv 8 192.160.15.33 sunny.k2.net 6 198.115.180.218 слип-14-18.slip.shore.net 21 193.2.109.130 сава 9 193.2.30.175 ppp1-ce2.arnes.si 1 193.2.31.110 ppp1-lj2-x.arnes.si 2 193.2.31.111 ppp1-lj3-x.arnes.si 1 193.2.31.175 ppp1-mb2.arnes.si 48 193.2.30.207 ppp1-nm2.arnes.si 2 193.2.30.184 ppp10-ce2.arnes.si 4 193.2.30.152 ppp10-kr2.arnes.si 4 193.2.31.101 ppp10-lj2-x.arnes.si 1 193.2.31.120 ppp10-lj3-x.arnes.si 6 193.2.31.184 ppp10-mb2.arnes.si 4 193.2.31.185 ppp11-mb2.arnes.si 11 193.2.31.169 ppp11-mb3.arnes.si 5 193.2.31.98 ppp13-lj2-x.arnes.si 6 193.2.31.123 ppp13-lj3-x.arnes.si 6 193.2.31.91 ppp13-lj4-x.arnes.si 8 193.2.31.124 ppp14-lj3-x.arnes.si 1 193.2.31.188 ppp14-mb2.arnes.si 4 193.2.31.125 ppp15-lj3-x.arnes.si 3 193.2.31.173 ppp15-mb3.arnes.si 10 193.2.31.126 ppp16-lj3-x.arnes.si 3 193.2.31.174 ppp16-mb3.arnes.si 5 193.2.30.176 ppp2-ce2.arnes.si 3 193.2.31.109 ppp2-lj2-x.arnes.si 3 193.2.31.112 ppp2-lj3-x.arnes.si 17 193.2.30.208 ppp2-nm2.arnes.si 2 193.2.30.177 ppp3-ce2.arnes.si 2 193.2.30.41 ppp3-kp3.arnes.si 2 193.2.30.145 ppp3-kr2.arnes.si 11 193.2.31.108 ppp3-lj2-x.arnes.si 1 193.2.30.105 ppp3-ms2.arnes.si 2 193.2.30.42 ppp4-kp3.arnes.si 7 193.2.30.146 ppp4-kr2.arnes.si 21 193.2.31.107 ppp4-lj2-x.arnes.si 5 193.2.31.178 ppp4-mb2.arnes.si 3 193.2.30.179 ppp5-ce2.arnes.si 2 193.2.31.106 ppp5-lj2-x.arnes.si 2 193.2.31.179 ppp5-mb2.arnes.si 4 193.2.31.163 ppp5-mb3.arnes.si 17 193.2.30.75 ppp5-ng2.arnes.si 3 193.2.30.180 ppp6-ce2.arnes.si 16 193.2.31.105 ppp6-lj2-x.arnes.si 8 193.2.31.116 ppp6-lj3-x.arnes.si 4 193.2.30.108 ppp6-ms2.arnes.si 1 193.2.30.181 ppp7-ce2.arnes.si 6 193.2.30.149 ppp7-kr2.arnes.si 5 193.2.31.85 ppp7-lj4-x.arnes.si 5 193.2.30.109 ppp7-ms2.arnes.si 4 193.2.30.77 ppp7-ng2.arnes.si 16 193.2.30.150 ppp8-kr2.arnes.si 11 193.2.31.103 ppp8-lj2-x.arnes.si 3 193.2.31.118 ppp8-lj3-x.arnes.si 1 193.2.31.182 ppp8-mb2.arnes.si 2 193.2.31.166 ppp8-mb3.arnes.si 5 193.2.30.110 ppp8-ms2.arnes.si 1 193.2.30.183 ppp9-ce2.arnes.si 11 193.2.31.102 ppp9-lj2-x.arnes.si 22 193.2.31.81 rpttlj14.arnes.si 14 193.2.31.82 rpttlj15.arnes.si 45 193.2.1.68 stenar.arnes.si 1 193.2.1.34 tosc.arnes.si 3 193.2.148.188 mostro.o-ckpiran.kp.edus.si 1 193.2.157.211 uc01.s-dgm.mb.edus.si 1 193.2.143.106 p06.s-gms.ms.edus.si 7 193.2.139.8 tscng-zb-1.s-tsc.ng.edus.si 1 193.2.5.24 poncho.ijs.si 1 193.2.4.248 scotty.ijs.si 15 193.2.115.34 firewall.lek.si 4 193.2.72.69 leoa2.fer.uni-lj.si 45 193.2.67.62 бири.fmf.uni-lj.si 1 193.2.67.103 mikus.fmf.uni-lj.si 10 193.2.67.110 p19.fmf.uni-lj.si 34 193.2.67.161 удаленный1.fmf.uni-lj.si 37 193.2.109.111 ru-j19-1.fmf.uni-lj.si 13 193.2.109.122 ru-j19-12.fmf.uni-lj.si 8 193.2.109.124 ru-j19-14.fmf.uni-lj.si 8 193.2.109.116 ru-j19-6.fmf.uni-lj.si 21 193.2.109.117 ru-j19-7.fmf.uni-lj.si 20 193.2.109.118 ru-j19-8.fmf.uni-lj.si 5 193.2.109.119 ru-j19-9.fmf.uni-lj.si 10 193.2.109.91 ru-j21-11.fmf.uni-lj.si 20 193.2.109.92 ru-j21-12.fmf.uni-lj.si 6 193.2.109.93 ru-j21-13.fmf.uni-lj.si 1 193.2.109.94 ru-j21-14.fmf.uni-lj.si 36 193.2.109.95 ru-j21-15.fmf.uni-lj.si 14 193.2.109.82 ru-j21-2.fmf.uni-lj.si 13 193.2.67.20 valjhun.fmf.uni-lj.si 74 193.2.67.107 vlado.fmf.uni-lj.si 4 193.2.72.50 colos1.fri.uni-lj.si 3 193.2.69.119 kristina-pc.mf.uni-lj.si 1 193.2.64.41 uek1.uni-lj.si 1 193.2.64.42 uek2.uni-lj.si 1 164.8.16.83 fsruc16.uni-mb.si 3 164.8.65.105 metka.uni-mb.si 1 164.8.13.6 lizika.pfmb.uni-mb.si 7 193.77.185.38 nat-6.zzzs.si 1 164.8.65.228 2 164.8.65.230 7 193.2.67.101 16 193.2.67.116 34 193.2.67.149 73 193.2.74.21 1 193.2.74.122 1 193.2.74.123 3 193.2.74.125 2 193.2.74.126 1 193.2,74,127 5 193.2.74.128 2 193.2.74.129 2 193.2.74.130 2 193.2.74.131 4 193.2.74.132 1 193.2.74.133 1 193.2.103.100 9 193.2.109.67 6 193.2.109.133 1 193.2.252.39 1 194.152.9.139 1 194.152.9.141 11 194.152.9.142 2 205.230.7.10 2 205.245.53.3 3 206.101.97.83 По домену ========= 5 пидор 21 сава 137 433 fmf.uni-lj.si (EDUCA) 1 час Хорватия (Hrvatska) 1 лв Латвия 486 si Slovenia 1 es Испания 1 ч Швейцария 7 com Коммерческая реклама США * 1 edu в США * 14 чистая сеть США * (* = в основном в США)
Альфа- и гамма-изоформы фосфопротеинфосфатазы 1 по-разному реагируют на лечение продигиозином и представляют альтернативные мишени киназы в клетках меланомы
Journal of Biophysical Chemistry
Vol.5 No 2 (2014), Идентификатор статьи: 45786,11 страницы DOI: 10.4236 / jbpc.2014.52008
Альфа- и гамма-изоформы фосфопротеинфосфатазы 1 по-разному реагируют на лечение продигиозином и представляют альтернативные мишени киназ в клетках меланомы
Маргарида 1 * , Жоао Фигейредо 1 , Маргарита Эспона-Фидлер 2 , Джулиана Фелгейрас 1 , Луис Корроди-Грегорио 1 , Сара Л.C. Esteves 1 , Sandra Rebelo 3 , Odete AB da Cruz Silva 3 , Edgar da Cruz e Silva 1 , Ricardo Pérez-Tómas 2
1 Лаборатория передачи сигналов Клеточная биология, Департамент биологии и Департамент медицинских наук, Университет Авейру, Авейру, Португалия
2 Департамент патологии и экспериментальной терапии, Исследовательская группа по клеточной биологии рака, Университет Барселоны, Барселона, Испания
3 Лаборатория неврологии, Центр клеточной биологии, Департамент биологии и Департамент медицинских наук, Университет Авейру, Авейру, Португалия
Электронная почта: * mfardilha @ ua.pt
Авторские права © 2014 авторов и Scientific Research Publishing Inc.
Эта работа находится под лицензией Creative Commons Attribution International License (CC BY).
http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
Поступила 17 марта 2014 г .; пересмотрена 17 апреля 2014 г .; принято 24 апреля 2014 г.
РЕЗЮМЕ
Обратимое фосфорилирование белков является центральным регуляторным механизмом функции клеток.Нарушение регуляции сбалансированного действия протеинкиназ и фосфатаз часто было связано с несколькими патологическими состояниями, включая рак. Многие исследования уже изучали роль неправильной регуляции протеинкиназ при раке. Однако о влиянии протеинфосфатаз известно гораздо меньше. Фосфопротеин фосфатаза 1 (PPP1) — одна из основных серин / треониновых протеинфосфатаз, которая имеет три каталитические изоформы: PPP1CA, PPP1CB и PPP1CC.Его функция достигается за счет связывания с регуляторными субъединицами, известными как белки, взаимодействующие с PPP1 (PIP), которые могут предпочитать каталитическую изоформу. Кроме того, некоторые ингибиторы / усилители могут проявлять изоформную специфичность. Здесь мы показываем, что продигиозин (PG), молекула с противораковыми свойствами, способствует образованию комплекса PPP1CA-AKT, а не комплекса PPP1CC-MAPK. Оба, AKT и MAPK, являются хорошо известными PIP из двух путей, которые пересекаются и регулируют выживаемость клеток меланомы.Кроме того, анализ, проведенный с использованием технологии поверхностного плазмонного резонанса (SPR), показывает, что PPP1 взаимодействует с обатоклаксом (OBX), лекарством, которое принадлежит к тому же семейству PG. В целом, эти результаты предполагают, что PG может, по крайней мере частично, действовать через PPP1C / PIPs. Кроме того, это исследование является пионером в демонстрации специфической для изоформы PPP1 модуляции небольшими молекулами.
Ключевые слова: фосфопротеинфосфатаза 1 каталитическая субъединица, поверхностный плазмонный резонанс, митоген-активированная протеинкиназа, вирусный онкоген мышиной тимомы V-Akt, гликоген-синтазокиназа 3
1.Введение
Обратимое фосфорилирование белков является основным внутриклеточным регуляторным механизмом у эукариот, возникающим в результате динамического и скоординированного действия протеинкиназ и фосфатаз [1]. Эта посттрансляционная модификация связана со многими сигнальными путями клеток, которые, в свою очередь, регулируют несколько клеточных событий [2] [3].Поэтому неудивительно, что некоторые из наиболее распространенных патологических состояний (например, рак, диабет и нейродегенеративные состояния) являются, по крайней мере частично, следствием аномального фосфорилирования ключевых белков [4].
Фосфопротеинфосфатаза 1 (PPP1), одна из наиболее важных серин / треонинфосфатаз, привлекает все большее внимание.Действия PPP1 зависят от взаимодействия его каталитической субъединицы (PPP1C) с регуляторными субъединицами, известными как PPP1-взаимодействующие белки (PIP). Следовательно, помимо роли PPP1 в прогрессировании клеточного цикла [5] [6] и апоптоза [7] [8], это два клеточных события, которые при дисфункции вызывают туморогенез, он также напрямую взаимодействует с белками, участвующими в определенных типах рака, такими как BRAC1 (рак груди) [9], AKT и MAPK (меланома, рак толстой кишки и др.)) [10] — [14]. Эти взаимодействия предполагают, что комплексы PPP1C / PIPs являются потенциальными мишенями для противоопухолевой терапии.
Соединения, которые непосредственно мешают PPP1C, использовались в качестве противораковых препаратов, причем не только как отдельные агенты, но и в сочетании с традиционными методами лечения. Некоторые природные токсины, такие как кантаридин (СТ) и его аналоги, были тщательно изучены, но у них все еще есть много недостатков, включая серьезные токсические побочные эффекты [15] [16].Альтернативно, нацеливание на комплексы PPP1C / PIP было продемонстрировано как замечательная стратегия, поскольку PIPs более специфичны для событий, ткани и субклеточного компартмента [4]. Например, лечение клеток глиобластомы и рака предстательной железы ингибитором гистоновых деацетилаз (HDAC), трихостатином А (TSA), разрушает комплекс PPP1C / HDAC6, что приводит к усилению дефосфорилирования или ацетилирования, например, AKT, что снижает его активность [ 17].Кроме того, образование комплекса PPP1-GADD34 снижается в клетках, обработанных салубриналом, небольшой молекулой, которая защищает клетку от апоптоза, вызванного ER-стрессом.
Ряд интересных противораковых свойств был также описан для нескольких членов семейства продигининов, причем продигиозин (PG) и обатоклакс (OBX) являются двумя из наиболее заметных.Предыдущие исследования показали, что проапоптотический эффект PG в клетках рака груди опосредуется индукцией гена NAG-1. Это происходит за счет активности киназы-3β гликогенсинтазы (GSK3β), нижележащего субстрата как путей PI3K / AKT, так и путей MAPK, которые сильно регулируются PPP1C [18]. С другой стороны, OBX был описан как миметик Bh4, нацеленный на несколько антиапоптотических членов семейства Bcl-2 [19], которые уже являются известными PIP [8].Однако механизм его действия остается малоизученным. Совсем недавно было идентифицировано несколько дополнительных протеинкиназ, которые негативно регулируются PG. Интересно, что все они участвуют в путях PI3K / AKT / mTOR и MAPK. Ингибирование таких киназ, в основном комплексов mTORC1 и mTORC2, завершается потерей фосфорилирования AKT по S473 [20].
Чтобы оценить роль PPP1C в опосредованном продигинином эффекте в онкогенезе, мы проанализировали действие PG в клеточных линиях меланомы человека, подвергнутых лечению ингибированием PPP1C. Более того, чтобы оценить PPP1C как потенциальную молекулярную мишень продигининов, мы выполнили анализ взаимодействия в реальном времени с использованием технологии поверхностного плазмонного резонанса (SPR).
2. Материалы и методы
2.1. Лекарства и реагенты
PG (2-метил-3-пентил-6-метоксипродигиозен) был предоставлен доктором Р. Дж. Шульцем из Национального хранилища химиотерапевтических агентов отделения химии и синтеза противораковых препаратов (Бетесда, Мэриленд).OBX, синтетический индолсодержащий продигинин, был предоставлен доктором Роберто Кесада из Университета Бургоса. CT был приобретен у Sigma-Aldrich (Синтра, Португалия). Все исходные растворы разбавляли ДМСО и хранили при -20 ° C.
2.2. Клеточные линии и условия культивирования
Клетки меланомы человека SK-MEL-5 были приобретены в Американской коллекции типовых культур (Барселона, Испания).Клетки культивировали в минимальной необходимой среде (MEM, Gibco, Мадрид, Испания), содержащей GlutaMAX с добавлением 5% фетальной бычьей сыворотки (FBS, Gibco, Мадрид, Испания), 1% L-глутамина, 10 мг / мл смеси антибиотиков и антимикотиков. (Gibco, Мадрид, Испания) и заменимых аминокислот и выращивали в увлажненном инкубаторе с 5% CO 2 при 37 ° C.
2.3. Вестерн-блоттинг
Вкратце, клетки обрабатывали 10 мкМСТ и 0,15 или 0,38 мкМ PG в течение 30 или 60 минут (подробности продолжительности обработки представлены на каждом рисунке). Затем клетки собирали в 1% додецилсульфате натрия (SDS), и содержание белка в клеточных лизатах определяли методом бицинхониновой кислоты (BCA) (Pierce, Rockford, IL, USA), используя бычий сывороточный альбумин в качестве стандарта.Нормализованные по массе образцы загружали в SDS-PAGE и затем переносили на нитроцеллюлозные мембраны (GE Healthcare, Carnaxide, Portugal). Иммуноблоттинг перенесенных белков выполняли, как описано ранее [21], и иммунореактивные полосы выявляли путем инкубации с вторичным антителом, конъюгированным с HRP, с последующим обнаружением ECL (Amersham Pharmacia, Piscataway, США).Все эксперименты повторяли не менее трех раз.
2.4. Антитела
Анти-PPP1CA-антитело (CBC2C, разведение 1: 2500) и анти-PPP1CC-антитело (CBC3C, разведение 1: 5000) против С-конца белков являются самодельными кроличьими поликлональными антителами из Центра клеточной биологии ( Университет Авейру, Португалия) [22].Анти-AKT (кат. 9272S, разведение 1: 1000), антифосфо AKT (S473) (кат. 9271S, разведение 1: 1000) и антифосфо-GSK3α / β (S21 / 9) (кат. 9331S), все выращенные на кроликах, были приобретены в Cell Signaling (Массачусетс, США). Мышиные антитела против MAPK (кат. 612280, разведение 1: 1000) получали от BD Biosciences (Мадрид, Испания), а кроличьи антитела против фосфо-MAPK (Thr202 / Tyr204) (разведение 1: 1000) получали от Santa Cruz Biotechnology. , Inc.(Гейдельберг, Германия). Моноклональные антитела против PARP и против β тубулина (разведение 1: 1000), оба выращенные на мышах, были приобретены в Zymed Laboratories, Inc. (Кембридж, Великобритания). Козье антитело против актина (кат. Sc-1616) было получено от Santa Cruz Biotechnology, Inc. (Гейдельберг, Германия), а мышиное анти-винкулинантитело (кат. V9131) от Sigma-Aldrich (Синтра, Португалия).
2.5. Анализ поверхностного плазмонного резонанса
Поверхностный плазмонный резонанс (SPR) был выполнен с использованием Biacore T100, который использует преимущества обнаружения SPR на золотых поверхностях и работы с реагентами в микрофлюидной системе. Эта чувствительная и высокопроизводительная система позволяет отслеживать в реальном времени взаимодействие между биомолекулами с использованием форматов анализа без меток.PPP1CA (New England BioLabs, Hitchin, UK) ковалентно присоединяли к сенсорному чипу CM5 в соответствии с протоколом аминового связывания. За активацией поверхности 1-этил-3 (3-диметиламинопропил) карбодиимидом (EDC) и N-гидроксисукцинимидом (NHS) следовала инъекция белка PPP1CA; избыток реакционноспособных групп дезактивировали этаноламином. PPP1CA разбавляли до 1 нг / мкл в ацетатном буфере с pH 4.8, и обездвижены до 3982 единиц ответа (RU). Все анализы проводили при 25 ° C с использованием буфера HBSN (10 мМ Hepes и 150 мМ NaCl, pH 7,4) с добавлением 100 мМ MgCl 2 . Тот же буфер использовали для разбавления OBX. OBX вводили на поверхности сенсора в течение 60 секунд со скоростью 30 мкл / мин. Комплексы регенерировали обратно с использованием 25 мМ NaOH. Тот же протокол применялся для PPP1CC, домашнего очищенного белка, за исключением рабочего буфера, состав которого был ранее описан в Stenlund, P.и другие. [23].
3. Результаты
3.1. Лечение продигизином и кантаридином имеет противоположные эффекты. Онфосфорилированный AKT в клетках меланомы
На первом этапе мы стремились определить участие PPP1 в системе обратимого фосфорилирования, которая регулирует сигнальный путь AKT.Для этого мы определили уровни экспрессии фосфорилированного AKT (pAKT, S463) в клетках меланомы человека, обработанных PG или CT. Клетки SK-MEL-5, полученные из метастазов в подмышечные узлы, обрабатывали 1 мкМ PG (соответствует IC50 через 24 часа [20]) или 10 мкМ CT (концентрация, которая ингибирует PPP1 [24]) в течение 30 и 60 минут. Лечение PG снизило уровень экспрессии pAKT на 60% через 30 минут и на 80% после 60 минут лечения, что соответствует предыдущим исследованиям [20].Напротив, лечение КТ увеличивало pAKT на 60% через 30 минут, при этом уровни возвращались к исходному уровню через 60 минут (Рисунок 1).
3.2. PPP1 связывает членов семейства Prodiginines
Принимая во внимание предыдущие результаты, мы предположили, что PG может действовать через PPP1.Таким образом, мы использовали подход взаимодействия в реальном времени, основанный на технологии SPR, чтобы рассмотреть способность членов семейства prodiginines связывать PPP1. Этот метод ранее применялся для характеристики связывания продигининов с mTOR [20].
Эксперименты по связыванию были инициированы иммобилизацией очищенных рекомбинантных белков PPP1CA или PPP1CC на поверхности сенсора.Затем аналиты (PG и OBX) вводили в раствор над поверхностью и анализировали взаимодействия, обеспечивая данные кинетики и сродства в наномолярном диапазоне. Из-за технических ограничений, включая осаждение PG в используемом буфере, нам не удалось сделать точных выводов о взаимодействии PPP1CA / CC с PG. С другой стороны, предсказанные аффинные и кинетические константы показали, что OBX связывается с тестируемой изоформой PPP1CA с рассчитанным K D в диапазоне наномолярных (1.8E − 10 ± 1,1E − 10 M). Полученная KD указывает на взаимодействие с высоким сродством. Более того, константа диссоциации Kd (0,017 с-1) указывает на то, что OBX связывается с PPP1CA, образуя стабильный комплекс (Рисунок 2).
Что касается PPP1CC, мы провели эксперименты согласно Stenlund, P. et al. [25], но мы использовали каликулин А вместо окадаиновой кислоты в буфере сочетания.Однако результаты не были такими последовательными, как для PPP1CA, показывая лишь незначительную способность связываться с OBX вместе с взаимодействием с низкой специфичностью (данные не показаны).
3.3. Воздействие кантаридина и продигиозина на PPP1C Ареизоформ-специфическое
Чтобы устранить эффекты PG и CT на PPP1CA и PPP1CC, мы провели последовательную обработку культивированных клеток.Клетки SK-MEL-5 предварительно инкубировали в течение 30 минут с 10 мкМ СТ с последующей инкубацией с 0,15 мкМ и 0,38 мкМ PG (что соответствует IC12,5 и IC25 через 24 часа, соответственно) в течение 30 минут или 60 минут. Затем оценивали уровни экспрессии обеих изоформ (рис. 3 (а) и рис. 3 (б)).
Чтобы убедиться, что наблюдаемый эффект был исключительно результатом действия лекарств, а не из-за гибели клеток, мы проанализировали апоптоз, используя передовой маркер апоптоза PARP.Для этого мы оценили соотношение расщепленного PARP / общего PARP (рис. 3 (c)).
PPP1CA и PPP1CC не проявляли сходных ответов на лечение PG, предшествовавшее лечению CT. Обработка 0,15 мкМ PG в течение 30 минут снижает уровни PPP1CA на 25%, в то время как уровни PPP1CC повышаются на 80%. После этого начального увеличения уровни PPP1CC снижались вместе с увеличением концентрации PG и времени инкубации.С другой стороны, снижение уровней PPP1CA оставалось наблюдаемым после 60-минутной обработки PG, но при обработке 1 мкМ PG уровни PPP1CA увеличивались.
3.4. PPP1CA и PPP1CC действуют на разные сигнальные пути в ответ на продигиозин: AKT и MAPK Pathways
Объяснение различных ответов изоформ PPP1 на лечение PG в клетках меланомы человека может лежать в различных нижестоящих эффектах на определенные гены, которые являются мишенями. соответствующих сигнальных белков.Поскольку на фосфорилирование AKT влияет лечение PG, мы проанализировали изменения в путях AKT и MAPK в ответ на указанное лечение и выяснили, коррелируют ли результаты с уровнями экспрессии PPP1CA и PPP1CC.
Интересно, что соотношение pAKT / AKT изменялось обратно пропорционально уровням PPP1CA (Рисунок 3 (a) и Рисунок 4 (a)), тогда как MAPK / pMAPK изменялся в соответствии с уровнями PPP1CC (Рисунок 3 (b) и Рисунок 4 (b). ).После 30 минут обработки PG PPP1CC достиг своего наивысшего уровня экспрессии, соответствующего самому низкому уровню pMAPK / MAPK, с противоположным, наблюдаемым через 60 минут обработки PG. Кроме того, был проанализирован паттерн экспрессии GSK3, общего субстрата AKT и MAPK, и его фосфорилированной формы, pGSK3.
Рисунок 1.Экспрессия фосфорилированного вирусного онкогена мышиной тимомы v-Akt (pAKT) в клетках SK-MEL-5, обработанных продигиозином (PG) или кантаридином (CT). Клетки обрабатывали 1 мкМ PG или 10 мкМ CT и клеточные экстракты анализировали на экспрессию pAKT с помощью иммуноблоттинга. Актин и винкулин использовали в качестве контроля загрузки. Эксперименты повторяли не менее двух раз.
Рис. 2. Кинетическая и аффинная характеристика связывания обатоклакса с изоформой фосфопротеинфосфатазы 1 α (PPP1CA) с помощью анализа поверхностного плазмонного резонанса. Обатоклакс (OBX) вводили в диапазоне концентраций от 0.04 нМ и 2,5 нМ поверх иммобилизованного PPP1CA. Сенсограммы и аппроксимации кривых (плавные линии), предполагающие взаимодействия 1: 1, изображены на панели A и B. Контрольные и пустые данные были вычтены. Сходные скорости диссоциации (KD) как на кинетической, так и на аффинной сенсограммах (панель C) подтверждают специфичность связывания. Эксперименты повторяли по крайней мере дважды.
(а) (б) (в)
Рисунок 3.Изоформы фосфопротеин фосфатазы 1 α и γ (PPP1CA и PPP1CC соответственно) имеют разные ответы на обработку продигиозином (PG) в клетках меланомы человека. Клетки SK-MEL-5 обрабатывали 10 мкМ кантаридина (СТ) в течение 30 минут, а затем инкубировали с 0,15 мкМ или 0,38 мкМ PG в течение 30 минут (2 и 4) или 60 минут (3 и 5).В качестве контроля (1) клетки инкубировали в течение 90 минут с 10 мкМ СТ. Экстракты клеток анализировали на экспрессию PPP1CA (a) и PPP1CC (b) с помощью иммуноблоттинга. Апоптоз оценивали с использованием общей поли-АДФ-рибозной полимеразы (PARP) и расщепленного PARP (cPARP). Тубулин использовали в качестве контроля нагрузки. Эксперименты повторяли не менее двух раз.
(а) (б) (в)
Рисунок 4.Изоформы фосфопротеинфосфатазы 1 α и γ (PPP1CA и PPP1CC соответственно) действуют на киназы из разных сигнальных путей. Клетки обрабатывали 10 мкМ кантаридина (СТ) в течение 30 минут, после чего инкубировали с 0,15 мкМ или 0,38 мкМ продигиозином (PG) в течение 30 минут (2 и 4) или 60 минут (3 и 5). В качестве контроля (1) клетки инкубировали в течение 90 минут с 10 мкМ СТ.Экстракты клеток анализировали иммуноблоттингом на вирусный онкоген мышиной тимомы v-Akt (AKT) и фосфорилированный AKT (pAKT) (a), митоген-активированную протеинкиназу (MAPK) и фосфорилированную MAPK (pMAPK) (b) и киназу гликогенсинтазы. 3 бета (GSK3) (c). Тубулин использовали в качестве контроля нагрузки. Эксперименты повторяли не менее двух раз.
при тех же условиях (рис. 4 (в)).Результаты показывают, что уровни экспрессии pGSK3 снизились вместе с уменьшением pMAPK (активной формы).
4. Обсуждение
Обратимое фосфорилирование белка является важной посттрансляционной модификацией, которая регулирует многочисленные клеточные процессы. Нарушение правильного баланса между протеинкиназами и фосфатазами приводит к возникновению и прогрессированию ряда патологических состояний, включая рак [6].
Протеинкиназы оказались дисфункциональными при многих типах рака; Таким образом, ингибиторы киназ широко используются в терапевтических целях [26] [27]. С другой стороны, протеинфосфатазы остаются плохо изученными, но привлекают все большее внимание. PPP1C, основная серин / треониновая фосфатаза, активность которой зависит от партнеров, с которыми она связывается, широко изучалась в качестве мишени для фармакологического вмешательства.Лечение, используемое при глиобластоме и клетках рака простаты, нацелено на комплекс PPP1C / HDAC6, который индуцирует дефосфорилирование pAKT — компонента сигнального пути, который при активации индуцирует пролиферацию и выживание клеток [28]. Предыдущая работа Xiao, L., et al. и Thayyullathil, F., et al. показали, что PPP1C может связывать pAKT, отвечая за его дефосфорилирование по остаткам T450 и S473 [11] [12].С другой стороны, работа Soto-Cerrato, V., et al. заявили, что PG, молекула с противораковыми свойствами, также способствует дефосфорилированию pAKT [18]. Эти предположения привели нас к гипотезе, что PG может действовать, по крайней мере частично, через комплексы PPP1C / PIPs.
Здесь мы рассмотрели эффект ингибирования PPP1 C на уровни экспрессии pAKT (S473), используя клетки меланомы человека, в которых было показано, что путь AKT гиперактивирован [29].Действительно, уровни pAKT (S473) увеличивались после 30 минут лечения CT и снижались в ответ на лечение PG, как и ожидалось (рис. 1). Это указывает на то, что дефосфорилирование AKT может, по крайней мере частично, осуществляться с помощью PPP1, как уже наблюдалось в других исследованиях [30]. Тем не менее механизм, с помощью которого PG приводит к дефосфорилированию AKT, остается неизвестным.
На следующем этапе, чтобы проанализировать способность PG к связыванию с PPP1C, мы сначала провели анализ связывания in vitro с использованием SPR. К сожалению, PG очень легко выпадал в осадок во время экспериментальной процедуры, и вместо него был использован OBX (аналог из того же семейства). В целом, результаты анализа SPR предполагают, что PPP1 является одной из мишеней продигининов, но изоформы проявляют явное сродство к лекарству.Оценка аффинности и кинетики взаимодействия подтвердила специфичность и высокую аффинность связывания с PPP1CA (рисунок 2 (а) и рисунок 2 (b)). Ранее аналогичный анализ был проведен для проверки связывания между PPP1CCA и двумя ингибиторами PPP1C (CT и окадаиновой кислотой) [23]. Хотя условия иммобилизации и буферы были разными, мы можем сделать некоторые предположительные интересные выводы, которые, тем не менее, должны быть подтверждены в ближайшем будущем.K d для связывания PPP1CA / OBX был выше (рис. 2 (c)), чем для PPP1CA / CT, таким образом, OBX мог гипотетически вытеснить CT из PPP1C. Однако связывание PPP1CA / CT оказывается более стабильным, поскольку K d ниже [23].
После демонстрации того, что PPP1CA может связываться с членом семейства продигининов, и знания того, что ингибирование PPP1C усиливает фосфорилирование AKT [31], были предприняты усилия, чтобы понять взаимосвязь между PPP1C и PG и их модулирующий потенциал в соответствующих сигнальных путях в меланоме человека. клетки.
Предварительная обработка CT в течение 30 минут, как предполагают наши результаты (Рисунок 3) и другие [24], должна ингибировать PPP1C, но не должна существенно изменять его количество. Следовательно, изменение уровней экспрессии PPP1C должно быть связано с присутствием PG. Интересно, что изменения, индуцированные в проанализированных изоформах PPP1C, были разными, что свидетельствует об отличном способе действия PG на PPP1CA и PPP1CC.Нет литературы, посвященной специфическому ингибированию или усилению изоформ PPP1 небольшими молекулами, поэтому эти данные открывают очень интересные вопросы.
PG, по-видимому, вытесняет CT из PPP1C (Рисунок 3) и каким-то образом изменяет количество PPP1 в клетках. Продолжительность лечения была слишком короткой, чтобы вызвать значительные изменения экспрессии белка на уровне мРНК; следовательно, объяснение может лежать в изменении процессов деградации белка и последующем стимулировании нацеливания PPP1CA на деградацию.Напротив, PPP1CC достиг пика через 30 минут обработки 0,15 мкМПГ (рис. 3 (b)), что может соответствовать компенсирующему эффекту, возникающему, например, в результате локальной трансляции мРНК PPP1CC [32], и его можно было обойти путем увеличения концентраций. PG или время инкубации.
Другое примечательное наблюдение заключалось в том, что паттерн экспрессии PPP1CA коррелировал с паттерном экспрессии AKT (рис. 4 (a)), но то же самое было подтверждено для PPP1CC.По этой причине мы продвинулись в изучении другой киназы, которая могла бы быть предпочтительной мишенью для PPP1CC. Сигнальный путь MAPK, который перекрестно взаимодействует с сигнальным путем AKT и ингибируется, когда последний активен, также сообщается как измененный при меланоме [13]. Неожиданно, фосфорилирование MAPK (фиг. 4 (b)) увеличивалось, когда уровни экспрессии PPP1CC были снижены.После 30 минут обработки 0,15 мкМ и 0,38 мкМФГ снижение фосфорилирования pMAPK составило 40% и 90% соответственно. Однако это снижение не было пропорционально увеличению уровней экспрессии PPP1CC, так как увеличение составило 80% (0,15 мкМ) и 20% (0,38 мкМ). Итак, мы предположили, что может быть задействована и другая киназа. На следующем этапе мы оценили уровни экспрессии GSK3 (рис. 4 (c)), общего субстрата как AKT, так и MAPK, и результаты показывают, что он находится под регуляцией MAPK в условиях эксперимента.В целом результаты показывают, что PPP1CA специфически дефосфорилирует pAKT, тогда как pMAPK является предпочтительной мишенью для PPP1CC. Кроме того, в условиях экспериментов MAPK, по-видимому, является основной киназой, ответственной за инактивацию GSK3 путем фосфорилирования.
5. Выводы
Идентификация предполагаемых мишеней фармакологического вмешательства, в основном сигнальных молекул, интересовала исследовательское сообщество, а также фармацевтические компании в течение последнего десятилетия.В последнее время особое внимание уделяется протеинфосфатазам, в частности комплексам PPP1 / PIP из-за их специфичности [28]. Что касается рака, то несколько компонентов сигнальных путей не регулируются, и, помимо этого, более одного пути могут способствовать канцерогенезу.
При меланоме несколько исследований указали на перекрестную связь между сигнальными путями MAPK и AKT [13].Например, активность B-RAF увеличивается после лечения ингибитором AKT [33] [34]. Взаимодействия между различными сигнальными путями могут регулировать механизм действия лекарств, делая их более или менее эффективными или способствуя устойчивости к лекарствам. Несколько исследований показали, что перекрестное взаимодействие между путями AKT и MAPK может быть более эффективно использовано для лечения меланомы путем ингибирования AKT, тем самым способствуя апоптозу и активируя RAF для индукции старения [13].
Здесь мы показываем, что PPP1CA предпочтительно связывает AKT, тогда как PPP1CC предпочитает MAPK. В присутствии PG PPP1CC будет подвергаться деградации, увеличивая фосфорилирование как MAPK, так и GSK3, и в конечном итоге это приведет к старению [13]. В то же время PPP1CA будет связывать AKT, способствуя его дефосфорилированию и, как следствие, апоптозу клеток (Рисунок 5) [11] [13].
(a) (b)
Рис. 5. Модель действия изоформ фосфопротеинфосфатазы 1 α и γ (PPP1CA и PPP1CC, соответственно) на вирусный онкоген мышиной тимомы v-Akt (AKT) и митоген-активированную протеинкиназу (MAPK) сигнальные пути.Изоформы фосфопротеинфосфатазы 1 при ингибировании кантаридином (СТ) способствуют активации обоих путей. Однако продигиозин (PG) может быть способен вытеснять CT из-за своего более высокого сродства, что приводит к деградации PPP1CC. Чтобы компенсировать это, уровни PPP1CA повышаются, дефосфорилируя AKT и, следовательно, преодолевая ингибирование Raf и способствуя старению и апоптозу.
В заключение мы предложили специфичное для изоформы PPP1C дефосфорилирование AKT и MAPK, которое может модулироваться PG, тем самым определяя выживаемость клеток меланомы и прогрессирование заболевания.
Выражение признательности
Авторы благодарят Марту Тауле за техническую помощь от Centres Científics i Tecnològics (Universitat de Barcelona).
Финансирование
Эта работа была поддержана грантами Fundação para a Ciência e Tecnologia (FCT) Министерства науки и высшего образования Португалии (PTDC / DTP-PIC / 0460/2012) и FEDER через программу Eixo I do Programa Соревновательные рабочие операции (POFC) (FCOMP-01-0124-FEDER-028692) при софинансировании QREN.
Заявление о раскрытии информации об авторе
Никаких конкурирующих финансовых интересов не существует.
Ссылки
- Shi, Y. (2009) Серин / треониновые фосфатазы: механизм через структуру. Cell, 139, 468-484.http://dx.doi.org/10.1016/j.cell.2009.10.006
- Вера, С. и Хеммингс, Б.А. (1995) Серин / треониновые протеинфосфатазы. Биохимический журнал, 311, 17-29.
- Боллен М. (2001) Комбинаторный контроль протеинфосфатазы-1. Тенденции в биохимических науках, 26, 426-431. http://dx.doi.org/10.1016 / S0968-0004 (01) 01836-9
- Fardilha, M., Esteves, S., Korrodi, L., da Cruz e Silva, O. и da Cruz e Silva, E. (2010). Протеиновая фосфатаза 1 и ее взаимодействующие белки для здоровья и болезней. Текущая лекарственная химия, 17, 3996-4017.
- Ладлоу, Дж. У. и Нельсон, Д.А. (1995) Контроль и активность серин / треониновой протеинфосфатазы типа 1 во время клеточного цикла.Семинары по биологии рака, 6, 195-202. http://dx.doi.org/10.1006/scbi.1995.0026
- Хаббард, М.Дж. и Коэн, П. (1993) О мишени с новым механизмом регуляции фосфорилирования белков. Тенденции в биохимических науках, 18, 172-177. http://dx.doi.org/10.1016/0968-0004(93)
-Z - Гарсия, А., Кайла, X., Герньон, Дж., Дессауге, Ф., Госпиталь, В., Реболло, М.П., Флейшер, А., Реболло, А. (2003) Серин / треониновые протеинфосфатазы PP1 и PP2A являются ключевыми участниками апоптоза. Biochimie, 85, 721-726. http://dx.doi.org/10.1016/j.biochi.2003.09.004
- Клумп, С. и Криглштейн, Дж. (2002) Сериновые / треониновые протеиновые фосфатазы в апоптозе. Current Opinion in Pharmacology, 2, 458-462.http://dx.doi.org/10.1016/S1471-4892(02)00176-5
- Winter, S., Bosnoyan-Collins, L., Pinnaduwage, D. и Andrulis, I. (2007) Взаимодействие PP1 с BRCA1 и анализ их экспрессии в опухолях груди. BMC Cancer, 7, 85. http://dx.doi.org/10.1186/1471-2407-7-85
- Осаки, М., Осимура, М.и Ито, Х. (2004) Путь PI3K-Akt: его функции и изменения при раке человека. Апоптоз, 9, 667-676. http://dx.doi.org/10.1023/B:APPT.0000045801.15585.dd
- Сяо, Л., Гун, LL, Юань, Д., Дэн, М., Цзэн, XM, Чен, LL, Чжан, Л., Янь, К., Лю, JP, Ху, XH, Сунь, С.М., Лю, Дж., Ма, Х.Л., Чжэн, CB, Фу, Х., Чен, ПК, Чжао, Дж.Q., Xie, S.S., Zou, L.J., Xiao, Y.M., Liu, W.B., Zhang, J., Liu, Y., и Li, D.W.C. (2010) Протеиновая фосфатаза-1 регулирует путь передачи сигнала Akt1 для контроля экспрессии генов, выживания клеток и дифференциации. Cell Death Differ, 17, 1448–1462. http://dx.doi.org/10.1038/cdd.2010.16
- Thayyullathil, F., Chathoth, S., Shahin, A., Kizhakkayil, J., Hago, A., Patel, M. и Galadari, S. (2011) Зависимое от протеинфосфатазы 1 дефосфорилирование Akt является основным сигнальным событием в индуцированном сфингозином апоптозе в камерах Юркат. Журнал клеточной биохимии, 112, 1138-1153. http://dx.doi.org/10.1002/jcb.23033
- Инамдар, Г.С., Мадхунапантула, С.В., Робертсон Г. (2010) Ориентация на путь MAPK при меланоме: почему одни подходы успешны, а другие терпят неудачу. Биохимическая фармакология, 80, 624-637. http://dx.doi.org/10.1016/j.bcp.2010.04.029
- Quevedo, C., Salinas, M. и Alcazar, A. (2003) Активность фактора инициации 2B регулируется протеинфосфатазой 1, которая Активируется митоген-активированным протеинкиназозависимым путем в нейрональных клетках, стимулированных инсулиноподобным фактором роста 1.Журнал биологической химии, 278, 16579-16586. http://dx.doi.org/10.1074/jbc.M212936200
- Sakoff, JA, Ackland, SP, Baldwin, ML, Keane, MA и McCluskey, A. (2002) Противораковая активность и ингибирование протеинфосфатазами 1 и 2A Новое поколение аналогов кантаридина. Новые исследуемые препараты, 20, 1-11. http://dx.doi.org/10.1023/A:1014460818734
- Маккласки, А., Ackland, S.P., Bowyer, M.C., Baldwin, M.L., Garner, J., Walkom, C.C. и Сакофф, Дж. (2003) Аналоги кантаридина: синтез и оценка ингибирования роста на панели выбранных линий опухолевых клеток. Биоорганическая химия, 31, 68-79. http://dx.doi.org/10.1016/S0045-2068(02)00524-2
- Чен, К.С., Вэн С.К., Ценг П.Х., Линь Х.П. и Chen, C.S. (2005) Независимый от ацетилирования гистонов эффект ингибиторов гистондеацетилазы на Akt посредством перетасовки комплексов протеинфосфатазы 1. Журнал биологической химии, 280, 38879-38887. http://dx.doi.org/10.1074/jbc.M505733200
- Сото-Серрато, В., Виньялс, Ф., Ламберт, Дж. Р., Келли, Дж. А. и Pérez-Tomás, R. (2007) Продигиозин индуцирует проапоптотический ген NAG-1 посредством активности гликоген-синтазы-киназы-3β в раковых клетках молочной железы человека. Molecular Cancer Therapeutics, 6, 362-369. http://dx.doi.org/10.1158/1535-7163.MCT-06-0266
- Перес-Томас Р.и Винас, М. (2010) Новые взгляды на противоопухолевые свойства продигининов. Текущая лекарственная химия, 17, 2222-2231.
- Эспона-Фидлер, М., Сото-Серрато, В., Хоссейни, А., Лискано, Дж. М., Гуаллар, В., Кесада, Р., Гао, Т. и Перес-Томас, Р. (2012) Идентификация двойных ингибиторов mTORC1 и mTORC2 в клетках меланомы: продигиозин vs.Obatoclax. Биохимическая фармакология, 83, 489-496. http://dx.doi.org/10.1016/j.bcp.2011.11.027
- da Cruz e Silva, O., Fardilha, M., Henriques, A., Rebelo, S., Vieira, S. и Da Круз и Сильва, Э. (2004) Сигнальная трансдукционная терапия. Журнал молекулярной неврологии, 23, 123-142. http: // dx.doi.org/10.1385/JMN:23:1-2:123
- Fardilha, M., Esteves, SLC, Korrodi-Gregório, L., Vintém, AP, Domingues, SC, Rebelo, S., Morrice, N. , Коэн, PTW, да Круз и Силва, OAB and da Cruz e Silva, E.F. (2011) Идентификация интерактома протеинфосфатазы 1 в семенниках человека. Биохимическая фармакология, 82, 1403-1415. http: //dx.doi.org / 10.1016 / j.bcp.2011.02.018
- Стенлунд П., Фростелл-Карлссон А. и Карлссон О.П. (2006) Исследования взаимодействий малых молекул с протеинфосфатазами с использованием биосенсорной технологии. Аналитическая биохимия, 353, 217-225. http://dx.doi.org/10.1016/j.ab.2006.03.004
- Honkanen, R.E. (1993) Cantharidin, Другой природный токсин, который ингибирует активность сериновых / треониновых протеинфосфатаз типов 1 и 2A.Письма FEBS, 330, 283-286. http://dx.doi.org/10.1016/0014-5793(93)80889-3
- Stenlund, P., Frostell-Karlsson, Å. и Карлссон, О.П. (2006) Исследования взаимодействий малых молекул с протеинфосфатазами с использованием биосенсорной технологии. Аналитическая биохимия, 353, 217-225. http://dx.doi.org/10.1016/j.ab.2006.03.004
- Беккер, Дж.К., Кирквуд, Дж. М., Агарвала, С. С., Даммер, Р., Шрама, Д. и Хаушильд, А. (2006) Молекулярно-направленная терапия меланомы. Рак, 107, 2317-2327. http://dx.doi.org/10.1002/cncr.22273
- Смолли, К.С.М. и Херлин, М. (2005) Нацеленность на внутриклеточные сигнальные пути как новая стратегия лечения меланомы. Анналы Нью-Йоркской академии наук, 1059, 16-25.http://dx.doi.org/10.1196/annals.1339.005
- МакКоннелл, Дж. Л. и Вадзински, Б. Э. (2009) Targeting Protein Serine / Threonine Phosphatases for Drug Development. Молекулярная фармакология, 75, 1249-1261. http://dx.doi.org/10.1124/mol.108.053140
- Stahl, J.M., Sharma, A., Cheung, M., Zimmerman, M., Cheng, J.Q., Bosenberg, M.W., Kester, M., Сандирасегаран Л. и Робертсон Г. (2004) Дерегулированная активность Akt3 способствует развитию злокачественной меланомы. Cancer Research, 64, 7002-7010. http://dx.doi.org/10.1158/0008-5472.CAN-04-1399
- Thayyullathil, F., Chathoth, S., Shahin, A., Kizhakkayil, J., Hago, A., Patel, М. и Галадари, С. (2011) Зависимое от фосфатазы 1 дефосфорилирование Akt является основным сигнальным событием в индуцированном сфингозином апоптозе в клетках Jurkat.Журнал клеточной биохимии, 112, 1138-1153. http://dx.doi.org/10.1002/jcb.23033
- Li, L., Ren, C.H., Tahir, S.A., Ren, C. и Thompson, T.C. (2003) Caveolin-1 поддерживает активированные Akt в клетках рака простаты посредством взаимодействий сайта связывания каркасного домена и ингибирования сериновых / треониновых протеинфосфатаз PP1 и PP2A.Молекулярная и клеточная биология, 23, 9389-9404. http://dx.doi.org/10.1128/MCB.23.24.9389-9404.2003
- Warner, S.L., Bearss, D.J., Han, H. и Von Hoff, D.D. (2003) Ориентация на киназу Aurora-2 при раке1. Molecular Cancer Therapeutics, 2, 589-595.
- Мериги, С., Бенини, А., Мирандола, П., Гесси, С., Варани, К., Леунг, Э., Макленнан, С., Баральди, П. и Бореа П.А. (2006) Модуляция пути Akt / Ras / Raf / MEK / ERK аденозиновым рецептором A 3 . Purinergic Signaling, 2, 627-632. http://dx.doi.org/10.1007/s11302-006-9020-4
- Guan, KL, Figueroa, C., Brtva, TR, Zhu, T., Taylor, Дж., Барбер, Т.Д. и Войтек, А.Б. (2000) Отрицательная регуляция серин / треонинкиназы B-Raf, Akt. Журнал биологической химии, 275, 27354-27359.
Сокращения
AKT: вирусный онкоген мышиной тимомы v-Akt;
Bcl-2: В-клеточная лимфома 2;
BRAC1: рак груди 1 с ранним началом;
B-RAF: гомолог В вирусного онкогена мышиной саркомы v-raf;
CT: кантаридин;
ER: эндоплазматический ретикулум;
GADD34: белок 34, вызывающий остановку роста и индуцируемый повреждением ДНК;
GSK3β: киназа-3 бета гликогенсинтазы;
HDAC: гистондеацетилаза;
MAPK: митоген-активированная протеинкиназа;
mTOR: мишень рапамицина у млекопитающих;
mTORC: комплекс mTOR; NAG-1: ген, активируемый нестероидным противовоспалительным лекарственным средством;
OBX: обатоклакс;
PARP: поли-АДФ-рибоза-полимераза;
PI3K: фосфоинозитид-3-киназа;
PIP: белок, взаимодействующий с PPP1;
PG: продигиозин;
PPP1: фосфопротеинфосфатаза 1;
PPP1C: каталитическая субъединица фосфопротеинфосфатазы 1;
PPP1CA: изоформа α фосфопротеинфосфатазы 1;
PPP1CC: изоформа γ фосфопротеинфосфатазы 1;
SPR: поверхностный плазмонный резонанс; TSA: трихостатин А.